TIROSINASA I

TIROSINASA I

JUAN CAMILO CATAÑO ZULETA

BARBARA PAULINA CHAVARRIA RUA

SALOME GOMEZ

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE INGENIERIA

MEDELLIN

2019

OBJETIVO:

* Objetivo general: Determinar la actividad de la tirosinasa utilizando como sustrato el L-DOPA.

* Objetivos específicos:

* Extraer la enzima Tirosinasa de un banano y determinar su actividad enzimática.

* Determinar los efectos de la temperatura y el pH sobre la actividad enzimática

PALABRAS CLAVE:

* Actividad enzimática de la Tirosinasa.

* Efecto de la temperatura sobre la enzima.

* Efecto del pH sobre la enzima .

* Cambios en la velocidad de reacción.

* Catálisis enzimática.

* Absorbancia como medida de la actividad de la Tirosinasa.

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ASPECTOS TEÓRICOS DE LA SECCIÓN

Las enzimas son catalizadores biológicos encargados de acelerar las reacciones bioquímicas, cada una de las cuales cataliza una reacción específica en la que un sustrato se convierte en los productos adecuados. En esta sección experimental llamada Tirosinasa I se busca entender principalmente la variación que presenta la actividad de la enzima Tirosinasa (monofenoloxidasa encargada del proceso metabólico en el cual algunas frutas al entrar en contacto con el oxígeno se va convirtiendo secuencialmente en otras enzimas hasta convertirse en Melanina encargada de darle una coloración café a la superficie de las frutas) frente a los cambios de la temperatura y el pH.

Factores como la concentración del sustrato y de la enzima, la ausencia o presencia de cofactores, inhibidores y efectores, el aumento o disminución de los mencionados temperatura y pH pueden afectar la velocidad de la reacción. En esta sección experimental en la que se sustrajo la enzima Tirosinasa de un banano, y se puso en contacto con el sustrato L-metildopa, evidenciamos los cambios que presentó la velocidad de la reacción sometidos a diferentes valores de pH, pues cada enzima tiene un pH específico (que se debe al comportamiento de la reacción ácido base que tiene el sustrato con la enzima) en el que su actividad es máxima.

También, vimos como la velocidad de la reacción se acelera frente al aumento de la temperatura en la solución, y corroboramos que cada enzima tiene una temperatura óptima en la que se da la reacción debido a que como es una proteína, las elevadas temperaturas pueden desnaturalizarla, inactivando su proceso. Provocando con esto un pico en una gráfica de la actividad enzimática frente al aumento de la temperatura.

Las velocidades de la reacción de la actividad de las enzimas pueden depender de muchos factores, podemos acelerar o desacelerar las reacciones enzima-sustrato mediante diferentes procesos…

Datos obtenidos en la medida de la actividad enzimática:

Tubo 1:

• 1 mL de extracto enzimático

• 3 mL de buffer pH = 7.2

• 1 mL de solución de L-metildopa

Tubo 2:

• 1.5 mL de extracto enzimático

• 2.5 mL de buffer pH = 7.2

• 1 mL de solución de L-metildopa

Tubo 3:

• 2 mL de extracto enzimático

• 2 mL de buffer pH = 7.2

• 1 mL de solución de L-metildopa

Tubo 4:

• 2.5 mL de extracto enzimático

• 1.5 mL de buffer pH = 7.2

• 1 mL de solución de L-metildopa

TABLA LARGA

Resultados:

MEDIDA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

1. Calcule las pendientes de las curvas y multiplique estos valores por los factores de dilución así:

• Tubo 1: m1 x 10/1.0 = A.E1

• Tubo 2: m2 x 10/1.5 = A.E2

• Tubo 3: m3 x 10/2.0 = A.E3

• Tubo 4: m4 x 10/2.5 = A.E4

* Fórmula para hallar la pendiente: m =A2-A1/ t2 - t1

* m1= (0.178-1.173)/(2-0) = 1/400

Tubo 1: (1/400 x 10)/1.0 = 0.025

* m2=(0.053-0.048)/(2-0) = 1/400

Tubo 2: (1/400x 10)/1.5 = 0.0166

* m3=(0.046-0.040)/(2-0) =3/1000

Tubo 3: (3/1000 x 10)/2.0 = 0.06

* m4=(0.049-0.041)/(2-0) = 1/250

Tubo 4: (1/250 x 10)/2.5 = 0.1

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ANÁLISIS

Debido a que la absorbancia es directamente