Extracción de Triptófano

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se tiene una solución de distintos aminoácidos, para su separación existe un método llamado fraccionamiento electroforético o electroforesis. Este utiliza la propiedad antes mencionada (Pi) para que estos aminoácidos en solución migren hacia dos nodos de cargas opuestas, quedando en solución solo los aminoácidos que no tienen carga porque el pH alcanzo su Pi.

Procedimientos:

Extracción de proteínas:

1) Colocar la cascara de banana en un mortero.

2) Colocar al mortero unas 10 gotas de detergente con un poco de agua.

3) Homogenizar con el vástago hasta disgregar lo máximo posible.

4) Separar en tubos de centrifuga y balancear.

5) Centrifugar 15 min a 14.000 rpm.

6) Extraer el sobrenadante con una micropipeta y colocar en un tubo de ensayo y taparlo.

Si se quiere guardar para continuar luego se debe guardar un una heladera o freezer.

Precipitación con Sulfato de amonio:

1) Realizar la disolución de sulfato de amonio SO4 (NH4)2 saturada al 75% m/v.

2) Al extracto crudo agregarle sulfato de amonio saturado en una proporción 1 a 1.

3) Agitar vigorosamente durante unos segundos.

4) Pasar a tubos de centrifuga y balancear.

5) Centrifugar 15 min a 14.000 rpm.

6) Separar luego los sobrenadantes y los pellet da cada tubo y colocarlos en recipientes separados.

7) Conservar en heladera o freezer.

Hidrólisis enzimática:

1) En un Erlenmeyer de 125 ml colocar una cantidad correspondiente a un gramo de proteína.

2) Se suspende en un volumen de 10 a 20 ml de agua destilada.

3) A continuación se agregan 17,5 ml de hidróxido de sodio 0,05 N. pH 8.

4) Luego se agregan 5 ml de una solución de papaína (1g en 50 ml, se agita, se deja reposar a 37º C por 30 min, luego se filtra).

5) El matraz se deja tapado toda por 16 horas a 70ºC.

6) Una vez terminada la hidrólisis se debe enseguida hacer la electroforesis (paso siguiente).

No dejar más de dos días la solución en la heladera porque según estudios hay una notoria disminución de los resultados

Electrolisis o electroforesis:

1) Dejo esto sin completar hablar con el