Malazzesia

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NTRO

inóculo

A partir de los últimos cultivos y se mantienen en el medio Mycosel con aceite de oliva y bilis de buey durante siete días a 32 ° C, el inóculo se preparó y se estandarizó en solución salina estéril. Inicialmente una suspensión comparativa con el tubo de 0,5 escala de McFarland fue preparado y recuento de células en una cámara de Neubauer. Se ajustó en el espectrofotómetro (Leitz-Fhotometer 340-800 nm) para contener aproximadamente 10 6 CFU / mL

Concentración mínima inhibitoria (MIC)

La determinación MIC de aceite esencial de C. citratus se realizó por la técnica de dilución en agar propuesto por Hadacek y Greger 22 con algunas modificaciones. Para la técnica, originalmente se prepararon placas de Petri (Petri-Dispo®) con 21 ml de medio de cultivo (Mycosel, bilis de buey y aceite de oliva), más el aceite esencial de C. citratus en 20-0.16 concentraciones l / ml, de acuerdo con Allegrini et al23. Posteriormente, 10 l de inóculos fúngicos se inocularon en la superficie del medio de cultivo solidificado. El sistema se incubó a 32 ° C durante siete días. Después del tiempo de incubación apropiado, la lectura se llevó a cabo. MIC se definió como la concentración de aceite más baja capaz de inhibir el crecimiento de hongos visualmente. Las pruebas se realizaron por duplicado y la

Se calculó la media geométrica de los resultados. valores de CIM90 se interpretaron como el MIC en la que hubo un 90% de inhibición del crecimiento de las cepas tested24. También se realizaron controles de viabilidad, sólo con los microorganismos en el medio y positivo, en el que el organismo fue desafiado con el fármaco antifúngico ketoconazol a 50 mg de concentración / ml.

prueba Sorbitol BioassayThe para determinar la MIC de aceite esencial de C. citratus se realizó como se ha descrito anteriormente, pero se añadió 0,8 M de sorbitol al medio como soporte osmótica. Las placas se incubaron durante siete días a 32 ° C25. Se considera como mecanismo de acción de los compuestos en la pared celular del hongo si el MIC compuestos en presencia de sorbitol son más altos que en su ausencia. Las pruebas se realizaron por duplicado y la media geométrica de los resultados se calculó 26.

ergosterol Bioensayo

Paralelamente a la determinación de la MIC, también se determinó la MIC en presencia de diferentes concentraciones de ergosterol (50 a 250 mg / ml) de Sigma-Aldrich®. Se considera como mecanismo de acción de los compuestos sobre la membrana plasmática de hongos cuando MIC del compuesto en presencia de ergosterol es mayor que en su ausencia. Las pruebas se realizaron por duplicado y se calculó la media geométrica de los resultados

.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

El análisis GC-MS de aceite esencial de C. citratus como resultado la identificación de 8 componentes (Tabla 1).

Geranial, neral y mirceno son los componentes principales, que representan más del 90% de los fitoquímicos. Estos resultados confirman estudios previos realizados por Kasali et al29

y

Andrade et al

30

*Tiempo de retención

Debido a algunas dificultades relacionadas con el crecimiento de Malassezia

spp. el uso de medios convencionales, tales como agar de dextrosa de Sabouraud y RPMI - 1640, a causa del carácter lipófilo de esta levadura, la técnica de agar

dilución propuesto por Hadacek y Greger 22 se modificó mediante el medio Mycosel más aceite al 1% de aceite de oliva. En la Tabla 2 se registran los resultados de CIM del aceite esencial de C. citratus en cepas del género Malassezia determinados por la técnica de dilución en agar. No hubo valores MIC90 que van desde 0,31 hasta 1,25 l / ml, dependiendo de las especies de Malassezia prueba.

Resultados encontrados para el aceite de C. citratus corroboran los estudios anteriores sobre el potencial antimicrobiano de este producto vegetal. Las actividades antimicrobianas del aceite esencial de C. citratus se atribuyeron a citral en un estudio llevado a cabo por Guerra et al31. El mirceno no mostró actividad antimicrobiana, pero cuando se combina con citral se ha potenciado su effect32.

En 2003, Belém et al33 realizó una evaluación antifúngica de productos naturales y sintéticos contra Malassezia furfur y química. En este estudio, el aceite jde C. citratus cepas de M. furfur inhibidos en todas las concentraciones