Reporteinge.
Enviado por Rebecca • 2 de Mayo de 2018 • 539 Palabras (3 Páginas) • 262 Visitas
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Tabla 3. Resultados y cálculos obtenidos en la electroforesis con respecto al marcador λ.
BANDA
Distancia (cm)
LOG TAMAÑO MOLECULAR
pb
1
3.3
4.36754227
23310
2
4
3.97386645
9416
3
4.6
3.81670518
6557
4
5.4
3.63958609
4361
5
7
3.36772855
2332
PCR2.1TOPO BAM
1
5.3
3.7
5271.8
PCR2.1TOPO ECOR1
1
5.3
3.7
5271.8
PCR2.1 TOPO SD
1
3.2
4.3
17899.5
2
4.9
3.8
6654.0
3
6.1
3.5
3309.2
PCR2.1TOPOAPESD
1
3.1
4.3
18972.3
2
4.3
4.0
9435.4
3
5.5
3.7
4692.5
PCR2.1TOPOAPEECOR1
1
5.4
3.7
4973.7
2
7.4
3.2
1552.7
PCR2.1TOPOAPEBAMH1
1
5.2
3.7
5587.8
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[pic 61]
DISCUSIÓN
El procedimiento de lisis alcalina, descripto por Birnboim & Doly constituye la base del método utilizado en nuestra práctica para la extracción de ADN plasmídico. Para la extracción de ADN plasmídico se lisaron las células por el agregado de un detergente (SDS) el cual degradó la membrana y NaOH. Así mismo las condiciones alcalinas desnaturalizan por completo las moléculas lineales de ADN, pero no las moléculas circulares covalentemente cerradas (las cuales sufren una desnaturalización parcial). El ADN cromosómico se obtuvo así mayoritariamente en forma fragmentada (múltiples moleculas lineales) y el plásmido que en relación es más pequeño, se mantuvo cerrado. Cuando el extracto celular fue neutralizado (con ácido acético glacial) bajo condiciones de alta concentración salina (acetato de potasio), el ADN cromosomal precipitó; obedeciendo a la reasociación inespecífica de las largas cadenas de ADN simple cadena, que ocurre en múltiples sitios formando una masa insoluble. También precipitan algunas proteínas debido a que la reacción se realiza en presencia de SDS y alta fuerza iónica, pero la extracción mayoritaria de las proteínas se realizó posteriormente con una mezcla de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico. Finalmente, el ADN purificado se concentró mediante precipitaciones alcohólicas. El cambio de polaridad del medio que genera el agregado de alcohol, y la disminución de la temperatura volvieron insoluble al ADN, lo que nos permitió recuperarlo así en un precipitado tras centrifugarlo.
Posteriormente el DNA plasmídico recombinante y no recombinante fue
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