Biofotonica_LLLT

Materiales

• Lámparas de alcohol
• Puntas
• Micropipetas
• Guante estéril
• PBS
• Placa de Op2
• Filtro estéril
• Frascos estériles
• Frascos para basura

Procedimiento

Se limpiar la zona de trabajo con alcohol

Con las micro pipeta colocar 10 ml de PBS en la placa de Op2 y raspar la placa para levantar todas las esporas para mezclararlas con el PBS, después se coloca toda la mezcla en el filtro esteril para filtrarla en un recipiente esteril, como el proceso de la filtración es muy lenta por si sola, se usa un guante esteril para tomar el filtro y presionarlo con mucho cuidado.

Se coloca 20 µ de la mezcla filtrada en la cámara para colocarlo en el microscopio con el objetivo x40 y contar las esporas por cuadro, después de contar 10 cuadros se hace unos cálculos para obtener la razón de disolución deseada, (2), del ensayo anterior resulto 1 de 29, entonces a la solución se le agrego 10µ de PBS 28 veces o 2800 µ.[pic 1]

 Se siembran dos controles, solo se colocan en las placas sin radiarlas 50µ de PBS y 50 de la solución en una placa.

La soluciones se colocan en un pozo 50µ de PBS y 50 de la solución en una placa, aislando cada muestra con tinta china.

2 placas de 3 repeticiones a 10J, tiempo expuesta  3´12´´

2 placas de 3 repeticiones a 20J, tiempo expuesta  6´25´´

2 placas de 2 repeticiones a 10J, tiempo expuesta  3´12´´

2 placas de 2 repeticiones a 20J, tiempo expuesta  6´25´´

Cada muestra se debe radiar con una diferencia de una hora.