INMUNOCITOQUÍMICA.

...

j) Alcohol 100° (dos pasajes)

Aclaración:

k) Xilol 3'

1) Montaje con bálsamo del Canadá y cubreobjetos.

OBSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS EN EL MICROSCOPIO

1) Evaluación de los resultados de la técnica aplicada en cada caso.

2) Apreciación de las diferentes estructuras observables para cada caso.

TRABAJO PRÁCTICO No 3

MITOSIS

INTRODUCCION:

En biología, la mitosis (del griego mitos, hebra) es un proceso de reparto equitativo del material hereditario característico de las células eucarióticas. Normalmente concluye con la formación de dos núcleos separados (cariocinesis) y lo más a menudo va seguida de citocinesis, división del citoplasma para formar dos células. La mitosis completa, que produce células genéticamente idénticas, es el fundamento del crecimiento, de la reparación tisular y de la reproducción asexual. La meiosis, un proceso que comparte mecanismos con la mitosis pero que no debe confundirse con ella, produce células genéticamente distintas y, combinada con la fecundación, es el fundamento de la sexualidad.

El resultado esencial de la mitosis es la continuidad de la información hereditaria de la célula madre en cada una de las dos células hijas. El genoma se compone de una determinada cantidad de genes organizados en cromosomas, hebras de ADN muy enrolladas que contienen la información genética vital para la célula y el organismo. Dado que cada célula hija debe ser genéticamente idéntica a la célula madre, ésta última debe hacer una copia de cada cromosoma antes de la mitosis. Esto ocurre durante la interfase, es decir, el período que alterna con la mitosis en el ciclo celular, y en el que la célula entre otras cosas se prepara para dividirse.

Tras la duplicación del ADN, cada cromosoma consistirá en dos copias idénticas de la misma hebra de ADN, llamadas cromátidas hermanas, unidas entre sí por una región del cromosoma llamada centrómero. Cada cromátida hermana no se considera un cromosoma en sí mismo, sino parte de un cromosoma que provisionalmente consta de dos cromátidas.

Se llama cariocinesis a la formación de dos núcleos con que concluye habitualmente la mitosis. Es posible, y ocurre en ciertos casos, que el reparto mitótico se produzca sin cariocinesis (endomitosis) dando lugar a un núcleo con el material hereditario duplicado (doble número de cromosomas).

[pic 1]

La mitosis se completa casi siempre con la llamada citocinesis o división del citoplasma. En las células animales la citocinesis se realiza por estrangulación: la célula se va estrechando por el centro hasta que al final se separa en dos. En las células de las plantas se realiza por tabicación, es decir, las células hijas “construyen” una nueva región de pared celular que dividirá la una de la otra dejando puentes de citoplasma (plasmodesmos). Al final, la célula madre se parte por la mitad, dando lugar a dos células hijas, cada una con una copia equivalente y completa del genoma original.

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La división de las células eucarióticas es parte de un ciclo vital continuo, el ciclo celular, en el que se distinguen dos períodos mayores, la interfase, durante la cual se produce la duplicación del ADN, y la mitosis, durante la cual se produce el reparto idéntico del material antesduplicado. La interfase típica se divide en tres fases:

- G1: Síntesis de proteínas

- S: Replicación del ADN

- G2: Síntesis de proteínas

Profase

Se produce la condensación del material genético (ADN) (que normalmente existe en forma de cromatina), con lo que se forman los cromosomas; y el desarrollo bipolar del huso mitótico. Uno de los hechos más tempranos de la profase en las células animales es la migración de dos pares de centríolos, previamente debe duplicarse el existente, hacia extremos opuestos de la célula.

Prometafase

La envoltura nuclear se ha desorganizado y el huso mitótico organizado. Los cromosomas han sido alcanzados por fibras del huso (microtúbulos).

Metafase

Se ha completado el huso mitótico, que aparece unido a los cromosomas por sus centrómeros, y más concretamente por unos anclajes proteicos llamados cinetocoros. Los cromosomas se ordenan en el plano ecuatorial, formando la placa ecuatorial (o metafásica).

Anafase

Es la fase más corta de la mitosis, en ella los microtúbulos del huso rompen los centrosomas longitudinalmente, lo que da lugar a la separación de las cromátidas hermanas, que se dirigen a polos opuestos.

Telofase

En la telofase se reconstituye la cromatina, adoptando la forma helicoidal los cromosomas, aparece el nucléolo, y se reconstruye la eucarioteca a partir del retículo endoplásmico.

Como consecuencia se ha dividido el material genético en dos núcleos idénticos, con lo que las dos células hijas que resultan si se diera la división del citoplasma (ver citocinesis) serían genéticamente idénticas.

OBJETIVOS

Realizar preparados temporarios de raíces de cebolla para estudiar mitosis.

Reconocer y analizar los distintos estadios de la división mitótica.

MATERIAL A UTILIZAR

Raicillas de Allium cepa (cebolla) fijadas en 3:1 (etanol absoluto: ácido acético glacial). Portaobjetos, cubreobjetos, pinza, jeringa para insulina, espátula plana, agujas enmangadas, colorantes (orceína acética o propiónica, carmín acético, hematoxilina propiónica férrica), papel absorbente. Preparados permanentes de mitosis de Allium cepa. Allium cepa se caracteriza por poseer cromosomas de gran tamaño y un número diploide relativamente bajo (2n= 16).

PARTE A:

ESTUDIO DE MITOSIS EN MERISTEMAS