L espacio ocupado por el paquete de células rojas cuando la sangre total es centrifugada
Enviado por Albert • 28 de Diciembre de 2018 • 10.449 Palabras (42 Páginas) • 465 Visitas
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DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA
Introducción
Esta determinación mide los gramos de Hemoglobina presentes en 100 ml de sangre completa.[pic 10]
La hemoglobina es transformada químicamente en un compuesto pigmentado y medido colorimétricamente.
Se efectúa una dilución exacta de 0.02 ml de sangre con 5 ml de un solución (Drabkin), la hemoglobina se convierte en cianometahemoglobina y se compara con un solución patrón de este compuesto de concentración exacta y estable. La dilución de la sangre es de 1:250.
Materiales
- Pipetas de Sahli.
- Tubos 13 x 100 mm.
- Estándar de cianometahemoglobina.
- Pipetas serológicas de 5 y 10 ml.
- Torniquete con boquilla.
- Cubetas de 12 x 75 mm.
- Reactivo de Drabkin.
- Espectrofotómetro.
Muestra: Sangre venosa anticoagulada con EDTA o sangre capilar tomada con capilares heparinizados.
Procedimiento
- Medir exactamente 5 ml de solución de Drabkin en dos tubos de ensayo 13 x 100 previamente rotulados como blanco y problema.
- Transferir exactamente 0.02 ml de sangre (con la pipeta de Sahli) al tubo rotulado “problema”. Asegúrese de que la muestra este muy bien homogenizada.
- Lavar 3 a 5 veces la pipeta en el líquido, mezclar por inversión varias veces.
- Dejar reposar durante 10 minutos, si se usa Drabkin modificado de 3 a 5 minutos.
- Leer contra el blanco de reactivo a 540 nm.
Valores De Referencia
Recién nacidos
14 - 20 g/dl
Niños 4 -12 meses
10 - 14 g/dl
Niños 1- 16 años
11.5- 14.5 g/dl
Varones adultos
14 - 18 g/dl
Mujeres adultas
12 - 16 g/dl
Fuentes de error
- Muestras con coágulos.
- Mala homogenización.
- Errores de dilución con el uso de pipetas de Sahli no calibradas o mal calibradas.
- Mala calibración del espectrofotómetro.
- Reactivo dejado a la exposición de la luz.
Importancia de los resultados
- Evalúa la gravedad de anemia o policitemia.
- Vigila la respuesta a tratamiento.
- Aporta cifras para calcular la HCM, CHCM.
RECUENTO DE ERITROCITOS
Introducción
El recuento de eritrocitos es el número de células rojas en un mm3 de sangre. Los métodos más comúnmente empleados son el Microscópico o manual y los electrónicos o automatizados.
La muestra sanguínea se diluye con líquidos isotónicos que no modifican la estructura de los eritrocitos y evitan la hemolisis. Además el líquido de dilución debe contener un fijador para preservar la forma eritrocitaria y prevenir la aglutinación y autolisis.
Una pequeña porción de la dilución se transfiere a una cámara de conteo (Neubauer o hemocitometro) las células rojas se cuentan al microscopio a mediano poder y se hacen los cálculos.
Materiales
- Cámara de Neubauer y cubre cámara.
- Pipeta de Thoma para glóbulos rojos.
- Torniquete con boquilla.
- Líquido de dilución para rojos: Solución Dacie.
- Contómetro.
Muestra: sangre anticoagulada con EDTA o sangre capilar.
Procedimiento:
- Adapte el torniquete con boquilla a la pipeta de Thoma, mezcle la muestra por inversión varias veces.
- Aspire sangre hasta la marca 0.5, limpie bien la parte externa de la pipeta con un pedazo de gaza para eliminar la sangre que ha quedado adherida y aspire liquido diluyente hasta la marca 101 (dilución 1:200)
- Retire el torniquete.
- Agite la pipeta durante dos o tres minutos, sujetándola por los extremos o en un agitador mecánico
- Elimine de tres a cinco gotas de la pipeta (estas corresponden a la porción capilar de la pipeta y no representan la muestra diluida).
- Llenar la cámara en reposo durante tres minutos.
- Enfoque en el microscopio en 10x y ubique el cuadrado central de la cámara al centro del campo microscópico. Luego enfocar en 40x.
- Desmontar la cámara y limpiarla con una gaza humedecida con alcohol primero y luego con una gaza seca.
Cálculos
- Sumar los recuentos de los 5 cuadrados.
- Aplicar formula:
Recuento de células/ mm3 = N° de células contadas x x Dilución.[pic 11]
Donde el volumen = 5 (lado x lado x profundidad)
= 5 (0.2 mm x 0.2 mm x 0.1 mm)
= 0.02 mm.
Sustituyendo x Dilución = x 200 = 10,000.[pic 12][pic 13]
Puede aplicarse el factor 10,000 y la formula se aplica así:
N° de Eritrocitos/ mm3 = N° de células contadas x 10,000.
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