Sanger

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- Discusiones:

Comparación

método de Edman

(degradación de Edman)

método de Sanger

(aplicado en la práctica)

Reactivo característico

Grupos de reacción

Derivados obtenidos

Condiciones

Reactivo de/y extracción

Identificación del aminoácido N-terminal

fenilisotiocianato (PITC), acido anhidro fuerte

Amino N-terminales de proteínas que pueden o no estar bloqueados o modificados pero no reacciona con los otros aminoácidos presentes en la proteína

Solo PTH-aminoácido del grupo amino N-terminal

Poco alcalinas

Se extrae de manera selectiva con un disolvente orgánico y convertido en feniltiohidantoina (PTH)

Comparando los tiempos de retención en cromatografía liquida de alta resolución del PTH- aminoácido N-terminal y otros PTH-aminoácidos

dinitrofluorobenceno (DNFB) e hidrolizar con acido

Amino N-terminal, y con los grupos R del resto de los aminoácidos presentes en la proteína.

DNP-aminoácido del grupo amino N-terminal y otros DNP aminoácidos presentes en la proteína.

Alcalinas

Se extrae con un disolvente orgánico

(utilizamos éter saturado con solución acuosa de FeSO4)

Comparando los Rf ‘s del DNP- aminoácido N-terminal y otros DNP-aminoácidos por cromatografía en papel (cámara saturada con ácido cítrico y citrato de sodio)

Diferencia en los métodos:

La degradación de Edman es considerado un método más eficiente y útil debido a que el reactivo utilizado en este método posee una ventaja frente al reactivo de Sanger pues es posible determinar la secuencia de hasta 100 aminoácidos N-terminales de una cadena polipepetídica mediante ciclos repetidos de la degradación de Edman. Esta técnica permite un gran ahorro de tiempo, material y reactivo.

Similitud en los métodos:

En ambos se requiere marcar específicamente al aminoácido N-terminal, uniéndolo covalentemente al grupo NH2, para que posteriormente con el debido procedimiento pueda ser extraído con un disolvente orgánico.

- Conclusiones:

- Bibliografía:

- Mc Gilvery, Bioquímica, Capìtulo1, Las proteínas

- Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer; Bioquímica 6ª edición, Capitulo 7, pág. 187 – 185.

- Stephen J. Weininger, Frank R. Stermitz, Quimica organica, pp. 901 -903 .

- Frank Bradley Armstrong, Thomas Peter Benett, Bioquimica, Capítulo 7, pag. 87-91.

- Voet, Voet, Bioquimica 3ª edicion, Capítulo 7, pág. 171 y 172