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Determinación de Ampicilina

Enviado por   •  7 de Julio de 2023  •  Informe  •  2.153 Palabras (9 Páginas)  •  300 Visitas

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 Informe de Prácticas de Laboratorio

Asignatura:

Química Farmacéutica I

NOTA

Practica Nº 2

Título: Determinación de Ampicilina por el método espectrofotométrico con ácido clorhídrico HCl 0,1N

Fecha de realización:

16/06/2023

Fecha de entrega:

23/06/2023

Grupo Nº 2

Carrera: Química Farmacéutica y Bioquímica y Farmacia

Integrantes:

  • Andrea Vargas (B y F)
  • Claudia Bermúdez
  • Gabriela Cadena
  • Dayana Caiza

Desarrollo:

  1. Resumen   

La presente práctica tiene como objetivo establecer el porcentaje de principio activo contenido en cápsulas de 500 mg de Ampicilina de laboratorios Portugal S.R.L. mediante el método espectrofotométrico. También se debe realizar el control organoléptico y las pruebas de identificación mediante los reactivos de Fehling y ácido cromotrópico. Para ello se pesó 60.2 mg de ampicilina, se trasvaso a un balón de 100 mL, añadiendo 20 mL de HCl 0,1N agitándose esta mezcla por 30 minutos. Se aforó y se leyó la absorbancia a una longitud de onda de 254 nm reflejando un valor promedio de 50,65. Para la identificación, en un tubo de ensayo se colocó mg de muestra disuelto en una cantidad suficiente de agua junto con 1 mL de Fehling A y B, se sometió a baño térmico y se observó una coloración verdosa. En otro tubo de ensayo se añadió 2 mg de la muestra con 2 mg de ácido cromotrópico, 2 mL de H2SO4 concentrado y se sometió a baño térmico con agitación constante, se observó una coloración café oscura. Los resultados exponen un porcentaje de principio activo promedio de 106,45%. Como conclusión, se determinó mediante el método espectrofotométrico la valoración de Ampicilina de 500mg de los laboratorios Portugal S.R.L, la cual cumple con las especificaciones de la USP 42, ya que contiene un promedio de principio activo de 106,45 por ende está en el rango permitido que es de 90% -120% del principio activo. 

  1. Introducción 

La ampicilina de 500 mg de laboratorios Portugal S.R.L es una penicilina considerada como agente antiinfeccioso para uso sistémico. Su nombre sistémico (IUPAC) es ácido 7-(2-amino-2-fenil-acetil) amino-3-dimetil-6-oxo-2-tia-5-azabicicloheptano-4 carboxílico. Cuya fórmula molecular es  con un peso molecular de 349,406 g/mol. El número CAS de la ampicilina es 69-53-4 (Merck, 2013)[pic 1][pic 2]

[pic 3]

La ampicilina pertenece al grupo de los beta-lactámicos, tiene acción bactericida por lo que produce la lisis directamente a los microorganismos. Inhibe la biosíntesis y reparación del mucopéptido de la pared celular bacteriana al unirse a los PBPs. También influye en la inactivación de la transpeptidasa impidiendo el entrecruzamiento de las cadenas de peptidoglucano provocando que su pared sea flácida. Es una penicilina de amplio espectro por lo que elimina microorganismos Gram + y Gram -, pero al no resistir la acción hidrolítica de las beta-lactamasas no se usa en el tratamiento frente a microorganismos estafilococos (Agencia española de medicamentos y productos sanitarios, 2003).

La ampicilina está indicada para el tratamiento de infecciones respiratorias, del tracto gastrointestinal, genitourinarias, meningitis, septicemia, endocarditis infecciosa; especialmente de cepas producidas por Haemophilus, Salmonella, Escherichia, Shigella, Proteus y Neisseria. (Vademecum, 2015). En el embarazo este medicamento se aplica para infecciones tracto urinarias, pero es necesario que su uso sea después de la segunda mitad del embarazo. Esta contraindicada en alergias a las penicilinas o cefalosporinas, así como en pacientes que presenten algún tipo de alergia, mononucleosis infecciosa e insuficiencia renal grave (iDoctus, 2012) . 

En las interacciones de la ampicilina, no debe ser administrada junto a provenecid, ya que inhibe su excreción tubular provocando aumento de los niveles plasmáticos. Es recomendable que no se administre en conjunto a aminoglucósidos, puesto que hay cambios sinérgicos. En los anticonceptivos la ampicilina reduce su eficacia. Los inhibidores de la bomba de protones reducen la biodisponibilidad de la ampicilina. Otros antibióticos bacteriostáticos pueden producir el efecto de antagonismo si se administra junto a la ampicilina (Vademecum, 2015).

Como reacciones adversas la ampicilina produce malestares gastrointestinales como náusea, vómito, dolor abdominal y diarrea considerados como frecuentes. En las reacciones poco frecuentes se presenta prurito, urticaria o edemas que son reacciones de hipersensibilidad leves, mientras que en las reacciones raras se presenta reacciones alérgicas graves, nefritis intersticial, colitis pseudomembranosa y neutropenia (iDoctus, 2012).

La ampicilina es estable en medio ácido gástrico por lo que se absorbe bien por la mucosa gastrointestinal. Puede ser administrada por vía oral y parenteral. Alcanza los niveles plasmáticos máximos a las 2 horas, ya que tiene una biodisponibilidad oral del 45%, mientras que al introducirse por vía intramuscular presenta una biodisponibilidad del 90% alcanzando los niveles plasmáticos máximos en 1 hora. Esta se debe administrar sin alimentos, puesto que en presencia de estos su absorción intestinal reduce en un 50%. Su distribución es amplia hacia los tejidos y generalmente en los fluidos ascíticos, sinovial y parapneumónico alcanza niveles elevados. Cuando las meninges están inflamadas la ampicilina cruza la barrera hematoencefálica provocando que haya concentraciones terapéuticas en el líquido cefalorraquídeo. Se une a las proteínas plasmáticas de un 15% al 20%. Tiene una semivida de eliminación de 0,75 horas. Se elimina con la orina y la bilis cuando está en altas concentraciones (Vademecum, 2015), (iDoctus, 2012).

  1. Método

 Valoración por el método espectrofotométrico 

 [pic 4]

 

Realizado por: Grupo 2

Identificación con reactivos de Fehling

 [pic 5]

 

Realizado por: Grupo 2

Identificación con Ácido cromotrópico

[pic 6]

Realizado por: Grupo 2

  1.  Boletín de Resultados

Tabla N° 1: Información del medicamento

INFORMACIÓN DEL MEDICAMENTO

Medicamento

Ampicilina

Laboratorio farmacéutico

Laboratorios Portugal S.R

Forma farmacéutica

Cápsulas duras

Registro sanitario

GBE-1354-04-10

Lote

2111632

Fecha de análisis

16/06/2023

Realizado por: Grupo 2

Tabla N° 2: Control organoléptico

Control organoléptico

Especificación

Resultado

Cumple/no cumple

Color

 Tapa negra, cuerpo rojo  

Tapa negra, cuerpo rojo 

 Si cumple 

Forma

 Cilíndrica  

Cilíndrica 

 Si cumple 

Sabor

Amargo

Amargo

Cumple

Aspecto

Cápsula de gelatina dura lisa de color rojo y negro, polvo blanco libre de partículas extrañas 

Cápsula de gelatina dura y lisa de tapa negra y cuerpo rojo con polvo blanco sin partículas 

 Si cumple 

Fuente: USP 42

Tabla N° 3: Control químico

Control Químico

% de PA

90-120%

Muestra promedio

106.45

Peso medio

 

602.45 mg

-

AV

0.466

Muestra 1

0.531

-

Muestra 2

0.482

-

Fuente: USP 42

  1. Conclusiones
  • Mediante el análisis organoléptico de la ampicilina de 500 mg de Laboratorios Portugal S.R se comprobó que son capsulas lisas y duras de gelatina de tapa negra y cuerpo rojo, con forma cilíndrica y contiene polvo blanco cristalino e inodoro y está libre de partículas extrañas cumpliendo así bibliográficamente con lo descrito por ARCSA.
  • Se determino mediante espectrofotometría la absorbancia que fue presentada en la tabla que corresponden a porcentajes de principio activo concluyendo que se encuentran dentro del rango establecido por la USP42 (90,0-120,0)%.
  • Mediante las pruebas de identificación se corroboro a la ampicilina como antibiótico betalactámico observando un color café al realizar el test con ácido cromotrópico y verde oscuro para el test de Fehling A y B, confirmando que la muestra presenta grupos carbonilos con poder reductor.
  1. Discusiones

Se realizaron los respectivos controles organolépticos para la ampicilina de 500 mg de Laboratorios Portugal S.R y se observó que las cápsulas de ampicilina poseen una forma cilíndrica con apariencia sólida, sin embargo, el polvo que es almacenado en su interior presenta un color blanquecino, homogéneo y prácticamente inodoro. (Tabla 2). Cada uno de los aspectos observados han sido comparados con las especificaciones emitidas por ARCSA (2016), validando que nuestras muestras cumplen con los parámetros establecidos por esta entidad pública.  

En base al análisis espectrofotométrico a 254 nm la cantidad del API en las cápsulas de ampicilina de 500 mg fabricadas por Laboratorios Portugal S.R resultó ser de 106,45 % por lo tanto se encuentra dentro del rango establecido por la USP 42 ( 90%-120% cantidad de ampicilina), aunque el valor muestra una pequeña diferencia que radica principalmente en la variación del peso de las cápsulas además por errores aleatorios al momento de aforar las soluciones estándar y de la muestra ,errores sistémicos como interferencia por la presencia de excipientes y una calibración no adecuada de la balanza analítica.

El reactivo de Fehling sirve para detectar la presencia de azúcares reductores, estos se identifican por la formación de un precitado de color rojo producto del poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído que pasa ácido reduciendo la sal cúprica de cobre (II) a óxido de cobre (I) (Beyer, 1987). La prueba de identificación con el reactivo de Fehling demostró ser negativa debido a que la muestra obtuvo una coloración amarilla verdosa y clara esto indica que no existe azúcares reductores.

  1. Referencias bibliográficas

Agencia española de medicamentos y productos sanitarios, S. (06 de marzo de 2003). Ampicilina. Obtenido de https://cima.aemps.es/cima/pdfs/es/p/48325/48325_p.pdf

ARCSA, S. (04 de Julio de 2005). Agencia Nacional de Regulación, Control y Vigilancia . Obtenido de https://aplicaciones.controlsanitario.gob.ec/publico/consultas/lista

iDoctus, S. (2012). Ampicilina. [Aplicación móvil].

García, S. (2010). Inertización por medio del método de hidrolisis a los antibióticos vencidos de los sub-grupos: betalactámicos, quinolonas, macrolidos y tetraciclinas. [Para optar al grado de licenciatura en química y farmacia, Universidad De El Salvador]. Recuperado de: https://ri.ues.edu.sv/id/eprint/469/1/10136185.pdf (2206/2023).

Merck, S. (2013). Merck, S.A. Obtenido de https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/172/950/a6140pis.pdf

Mosquito, S., Ruiz, J., Bauer, J. L., & Ochoa, T. J. (2011). Mecanismos moleculares de resistencia antibiótica en Escherichia coli asociadas a diarrea. Revista peruana de medicina experimental y salud pública, 28, 648-656.

USP 42. (2019). FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMÉRICA. Cuadragésima Segunda Revisión. 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852. THE UNITED STATES PHARMACOPEIAL CONVENTION.

Vademecum, S. (2015). ACCESS-Medicina. Obtenido de

Beyer, H. (1987). Manual de química orgánica . Barcelona : Reverté.

  1. Cuestionario
  1.  Mecanismo de acción de la hidrolisis de la penicilina.

Las penicilinas pueden degradarse mediante hidrólisis ácida o alcalina debido a la presencia del anillo β-lactámico, así como del radical ácido unido al grupo amino del ácido 6-aminopenicilánico (6-APA).

La hidrólisis alcalina se inicia con el ataque nucleófilo sobre el carbono carbonílico del anillo β-lactámico, con la formación de un intermedio tetraédrico, seguido de la apertura del anillo para dar el ácido peniciloico. El grupo carboxilo presente en el ácido peniciloico, después de la apertura del enlace, se somete a una descarboxilación que da lugar al ácido penicárico y la transferencia de un hidrógeno al nitrógeno lactámico. Al obtener el ácido peniciloico como producto de degradación la molécula es inactivada (García, 2010).

[pic 7]

Fig.1. Hidrolisis alcalina.

En la hidrólisis ácida, el anillo β-lactámico altamente tenso y su enlace amida se rompen dando una gama de productos complejos como el ácido penílico, ácido peniciloico y ácido penicilénico. En un medio ácido fuerte (pH 2 o menos), sufre una reestructuración a través de la formación de oxazolina que da lugar al ácido penílico inactivando el grupo farmacóforo de la molécula (García, 2010).

  1. En que afecta los radicales R1 y R2, en las propiedades físicas, químicas y farmacológicas de las penicilinas.

Radical R1: afecta las propiedades antibacterianas, farmacológicas y farmacocinéticas, teniendo antibióticos potentes, de amplio espectro bactericidas y de baja toxicidad, además brinda estabilidad a pH ácido y le da resistencia frente a la acción de betalactamasas.

Radical R2: Influye en la solubilidad y tiempo de acción del fármaco (Mosquito, Ruiz, Bauer & Ochoa, 2011).

  1. Discutir sobre el fundamento de identificación y valoración y compararlo con los dispuestos en la USP.

La ampicilina es un antibiótico de amplio espectro que forma parte de los antibióticos β- lactámicos (penicilinas), estos antibióticos sufren hidrolisis en medio alcalino y en medio ácido ya que se usa HCl de concentración 0,1N. Por otra parte, las penicilinas no tienen grupo criogénicos en su estructura, pero al momento de hidrolizarse, se forma un grupo criogénico, el cual tiene un máximo de absorbancia en los 254 nm que es la longitud de onda a la que se lleva a cabo su determinación de acuerdo a la USP 42. Los procesos dispuestos en la USP para la identificación de ampicilina para suspensión oral se usa la cromatografía en capa delgada usando de diluyente Acetona y ácido clorhídrico O, 1 N (4:1), Solución muestra: 5 mg/mL de ampicilina en Diluyente, a partir del contenido de Cápsulas Sistema cromatográfico, adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cromatografía de 0,25 mm, volumen de aplicación: 2 µL, fase móvil: Acetona, tolueno, ácido acético glacial y agua (650:100:25:100), solución reveladora: 3 mg/mL de ninhidrina en alcohol. La valoración se realiza mediante valoración yodométrica  la cual es utiliza para la valoración de la mayoría de los medicamentos antibióticos farmacopeicos derivados de la penicilina y sus formas farmacéuticas, en cambio en el laboratorio se utilizó el método espectrofotométrico (USP 42, 2019).

  1. Anexos

Anexos No fotos cálculos o tablas que no se encuentren en el boletín de resultados

  • Tabla 1. Datos de peso bruto y peso neto.

PESO BRUTO (mg) 

PESO CÁPSULA (mg) 

PESO NETO (mg) 

688,8

103,7

 585,1

670,0

 76,2

593,8

 712,5

102,0

610,5

708,9

 98,2

610,7

699,5

 100,8

 598,7

697,5

 99,1

 598,4

713,6

 101,1

 612,5

 705,1

 101,2

 602,9

 696,7

 98,8

 597,9

 712,6

 98,6

 614,0

Peso promedio: 602,45 mg

Desviación estándar: 9,395± 

 

  • Lecturas de absorbancia del estándar de la ampicilina

 

Absorbancia 1

0,466

Absorbancia 2

0,487

Promedio  

0,4765

 

  • Lecturas de absorbancia de la muestra de la ampicilina

 

Absorbancia 1

0,531

Absorbancia 2

0,482

Promedio  

0,5065

 

 

  • Cálculo del peso de la muestra para la determinación.

[pic 8]

[pic 9]

[pic 10]

  • Cálculo de concentración del estándar

[pic 11]

[pic 12]

[pic 13]

  • Cálculo del Factor de Dilución

[pic 14]

[pic 15]

[pic 16]

  • Cálculo del Concentración de la muestra

[pic 17]

[pic 18]

Muestra 1

[pic 19]

 [pic 20]

[pic 21]

[pic 22]

[pic 23]

[pic 24]

[pic 25]

[pic 26]

 

Muestra 2

[pic 27]

 [pic 28]

[pic 29]

[pic 30]

[pic 31]

[pic 32]

[pic 33]

[pic 34]

 [pic 35][pic 36]

  • Cálculo de porcentaje de API

 

[pic 37]

[pic 38]

...

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