Dothistroma roya de la acicula: una epidemia emergente causada por septosporum Dothistroma en Colombia

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Se observaron características morfológicas del hongo utilizando un microscopio Nikon Eclipse E200. portaobjetos de microscopio eran preparado mediante la fijación de conidios conidiomas-cojinete, extirpados de agujas enfermas, con ácido láctico 1%. ADN comparaciones basadas en secuencias identificaciones de especies fueron hechas por varias culturas aisladas de agujas recogidos de cada una de las tres zonas forestales y desde diferentes hospederos. El micelio se raspó de la superficie de los cultivos en agar, liofilizado y se trituran con el MM301 molino mezclador (Retsch) durante 3 min a 1/30 MHz. El micelio triturado se calentó a 65 ° C en tampón de 800 lL DEB (Tris 200 mMHCl pH 8? 0, NaCl 250 mM, EDTA 25 mM, 0? 5% de SDS) durante 1 h y el ADN se extrajo utilizando el método descrito por Barnes et al. (2001).

El espaciador transcrito interno ADNr se amplificó (ITS) para los aislados seleccionados usando cebadores ITS1 e ITS4 (blanco et al., 1990). La mezcla de reacción consistía en 5 ng de ADN molde, 200 nM de cada cebador, 0? 2 mM de cada dNTP, 1 U de Taq Comienzo Acelerado ADN polimerasa con 10 9 tampón (Roche) y 1? MgCl2 5 mM.

Las condiciones de ciclación se fijaron en 96 ° C durante 2 min; luego 10 ciclos de 94 ° C durante 30 s, 56 ° C durante 30 s y 72 ° C durante 1 min. un adicional 30 ciclos se incluyeron con el tiempo de recocido alterado a 40 s y un 5 s después de cada ciclo de extensión con una elongación final de 10 min a 72 ° C. amplicones de PCR se visualizaron en 2% geles de agarosa y limpiados utilizando Sephadex G-50 columnas (Sigma-Aldrich). Secuenciación de los amplicones se llevó a cabo usando el ABI PRISM BigDye Reacción kit Terminator Cycle Sequencing Ready (Applied Bio- Sistemas) siguiendo los protocolos del fabricante y procesamiento, en un ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems).

Las secuencias fueron analizadas en CVX BIO (PRINCIPAL BANCO DE TRABAJO v. 6.6.2) y alineados utilizando la versión en línea de MAFFT v 6 (http:. // Mafft. cbrc.jp/alignment/server/). filogenético de máxima parsimonia análisis se realizaron en PAUP * v. 4.0b10 (Swofford, 2002) usando la opción de búsqueda heurística con adición gradual al azar y reconexión de bisección árbol como el algoritmo de intercambio de árbol. Bootstrap análisis se llevaron a cabo con 1000 la asignación al azar. Los árboles tienen sus raíces con datos de la secuencia de L. acicola como el taxón fuera del grupo.

La susceptibilidad de P. tecunumanii progenie Se establecieron los estudios de susceptibilidad en la granja Graminea ubicada a 5 ° 25019 "N, 75 ° 45056" W, (zona Norte, Caldas; Fig. 1) de 2155 m snm, con una precipitación anual de 2560 mm y una temperatura media de 18 ° C. En este sitio, el 27 P. diferente tecunumanii progenie LE (medios hermanos cruza donde el progenitor femenino se conoce) se había plantado aproximadamente 2 km de un área muy fuertemente afectados por el tizón de la aguja. Árboles en la parcela se establecieron en noviembre de 2008 y la primera enfermedad los síntomas se registraron 2 años más tarde, en noviembre de 2010.

Se utilizaron un total de 1260 árboles distribuidos de manera uniforme en seis bloques en el ensayo. Cada bloque incluye seis árboles cada una de las 27 diferentes P. tecunumanii progenie LE. Con fines comparativos, cada bloque también incluyó seis árboles cada una de las cuatro diferentes P. tecunumanii procedencias [PTEBsuH1 (LE), PTEByucu (LE), PTEAcaH1 (HE), TECASaH1 (HE)], dos procedencias (MAXcabH1, MAXcabH2) de P. maximinoi y dos procedencias (PKcalvH1, PKcalvH2) de P. kesiya. La incidencia de la enfermedad se evaluó dividiendo el número total árboles de afectados por el número total de árboles plantados para cada una de las progenies P. tecunumanii LE (972 árboles que representan 27 progenie), así como para los tratamientos adicionales (288 árboles en representación de ocho procedencias).

La gravedad de la enfermedad por árbol se calculó dividiendo la área foliar del árbol en cuatro partes iguales. Cada trimestre fue entonces evaluados de forma individual y el nivel relativo de enfermedad presente en esa parte del árbol se registra como un porcentaje del total corona (Fig. 2). Para acomodar la diferencia en cónico área representada por cada trimestre, los datos recogidos fueron entonces reponderado estadísticamente de manera que el cuarto inferior del árbol correspondería a máximo 40% de la superficie total de árbol infectado, el segundo trimestre representó el 30%, el tercero 20%, y la corona 10%. El porcentaje ponderado de cada trimestre a continuación, se suman para obtener la gravedad global por árbol. Un total de seis evaluaciones de incidencia y severidad se realizaron en el ensayo Graminea en noviembre de 2010, feb 2011, Mayo 2011, ago 2011, noviembre de 2011 y mayo de 2012. Los datos utilizados para calcular la incidencia de la enfermedad y la gravedad media del porcentaje fueron analizados utilizando estadística descriptiva y evaluación de datos para supuestos de normalidad y homogeneidad de procedencia / progenie varianzas. Análisis de la varianza (ANOVA) para un completamente al azar

diseño (seis bloques) se utilizó para probar las diferencias entre progenie y procedencias. Se utilizó una prueba de rango múltiple de la comparación de medias en el nivel del 5% (SAS PROC INSIGHT). Sólo los datos Para la recolección de de 2012 estaban utilizado para los cálculos de incidencia de la enfermedad, mientras que se utilizó la media sobre todas las seis períodos de evaluación para los cálculos de severidad. impacto de la enfermedad en las plantaciones Las evaluaciones del impacto de la enfermedad se realizaron a 11 forestal fincas distribuidas en las zonas del Norte, Central y del Sur (Tabla 1). parcelas circulares, 9? 78 m de radio (300 m2), que figura aproximadamente el 30 plantaron árboles (densidad de plantación de 3 9 3 m).

Estas parcelas fueron seleccionados al azar dentro gravemente enfermos plantaciones que mostraron una amplia gama de altitudes y tiempo condiciones tales como la precipitación (Tabla 1). Un total de 90 parcelas, que representa el 1% de la superficie total afectada (una parcela por cada 3 hectáreas de zona afectada), fueron evaluados. El impacto de la enfermedad en un área se determinó calculando la incidencia de la enfermedad como el número total de árboles afectados en cada parcela dividida por el número total de árboles de la parcela.

La gravedad de la enfermedad se calculó como se describe anteriormente para la graminea juicio. evaluaciones de la enfermedad se hicieron al menos cuatro veces al año a partir de abril de 2009 a enero 2012 en cada una de las 90 parcelas. Los factores abióticos tales como la precipitación,