DETERMINACIÓN DE LAS ACTIVIDADES NITRATO Y NITRITO REDUCTASA EN PLANTAS. EFECTO DE LA NUTRICIÓN NITROGENADA

...

Mirando los valores de la tabla nos damos cuenta que los valores mayores de nitrito formados son los de amonio ya que es más fácil de asimilar, aunque la nitrato reductasa su sustrato específico es el nitrato que presenta valores similares al amonio.

- ACTIVIDAD IN VITRO NITRITO REDUCTASA (NiR)

[pic 4]

Medida de la actividad de la NiR

Para calcular la actividad NiR se necesita preparar dos tiempos, uno a tiempo cero y otro a 30 min.

Condiciones de cultivo. Composición nitrogenada de las disoluciones nutritivas en t0 y t30

Absorbancia

a

540 nm en t0

Absorbancia

a

540 nm en t30

Diferencia de absorbancia

t0 - t30

- N (sin nitrógeno)

1,389

0,959

0,43

NO3- (con nitrato)

1,465

0,698

0,767

NH4+ (con amonio)

1,614

1,093

0,521

NO3- + NH4+ (con ambas)

1,404

0,618

0,786

Al igual que con la medida de la actividad de NR, la mezcla de incubación para la medida de NiR se hace en eppendorf en un volumen final de 1 mL.

- N

NO3-

NH4+

NO3- + NH4+

Conclusión según los resultados:

Cuando no añadimos nitrógeno a la muestra la transformación de nitrito a nitrógeno se da, porque el nitrito se puede obtener por otros medios, y no solo por el paso de nitrato a nitrito por la NR. Cuando ponemos nitrato en el medio, la NR lo transforma en nitrito, y este puede ser transformado a amonio por la nitrito reductasa (NiR). Cuando ponemos en la muestra tanto nitrato como amonio, podemos fijarnos que la desaparición del nitrito es muy próxima a la de que cuando solo ponemos el nitrito, esto ocurre porque la NiR primero transforma todo el nitrito que tiene, y cuando este se ha acabado comienza a transformar otros compuestos. El amonio es un regulador negativo de la NiR, como ya hay amonio en el medio, la planta no necesita que la NiR transforme el nitrito en amonio.

En este caso vemos los μmoles nitrito desaparecido en las muestras donde el segundo valor más alto es el nitrito, seguido por la planta con nitrito y amonio, esto es debido a que la enzima nitrito reductasa es específica para el nitrito haciéndolo desaparecer más rápido. Los valores esperados para la hoja sin nitrógeno son más bajos, es decir que se aprecia una mayor actividad; lo que nos hace suponer que el cultivo pudiese estar infectado de bacterias nitrificantes en la vermiculita.