Método Enzima unida Ensayo de inmunoabsorción
Enviado por Ensa05 • 1 de Mayo de 2018 • 1.531 Palabras (7 Páginas) • 230 Visitas
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PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
1. Asegure el número deseado de pozos recubiertos en el soporte.
2. Dispensar 50 ⎧ l de estándares, muestras y controles en los wel apropiada
3. Dispensar 100 μυ l de reactivo de conjugado enzimático en cada pocillo.
4. Mezcle completamente durante 30 segundos. Es muy importante tener
Mezclando en este paso.
5. Incubar a temperatura ambiente (18-22 ° C) durante aproximadamente 60 minutos
6. Retire la mezcla de incubación sacudiendo el contenido de la placa en un residuo
envase.
7. Enjuague y mueva los pocillos de microtitulación cinco veces con tampón de lavado (1X).
8. Golpee los pocillos bruscamente sobre papel absorbente o toallas de papel para
Gotas de agua residual.
9. Dispensar 100 μυ l de solución de TMB en cada pocillo. Mezclar suavemente durante 5 segundos.
10. Incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
11. Detener la reacción mediante la adición de 100 ⎧ l de solución de parada a cada pocillo.
12. Mezcle suavemente durante 30 segundos. Es importante asegurarse de que todo el azul
El color cambia completamente al color amarillo.
13. Leer densidad óptica a 450 nm con un lector de pocillos de microtitulación.
Nota IMPORTANTE:
El procedimiento de lavado es crítico. Un lavado insuficiente resultará en
Precisión y lecturas de absorbancia falsamente elevadas.
RESULTADOS
Calcular el valor de absorbancia media (A450) para cada conjunto de patrones de referencia,
Especímenes, controles y muestras de pacientes. Construir una curva estándar trazando
La absorbancia media obtenida de cada patrón de referencia frente a su
concentración en μυ IU / ml en papel cuadriculado, con valores de absorbancia en el eje vertical
O el eje Y y las concentraciones en el eje horizontal o X. Utilice la media
Valores de absorbancia para cada muestra para determinar la
concentración de TSH en μυ IU / ml a partir de la curva estándar.
Ejemplo de curva estándar
Resultados de un ensayo estándar típico con lectura de densidad óptica a 450 nm mostrada
En el eje Y frente a concentraciones de TSH mostradas en el eje X. Este estándar
La curva es sólo con fines ilustrativos y no debe usarse para calcular
Desconocidos Cada usuario debe obtener sus propios datos y la curva estándar
Valores esperados y sensibilidad
Los valores medios de TSH basados en 160 muestras aleatorias de sangre de adultos, son 1,6
(0,4-7,0) ⎧ IU / ml. La concentración mínima detectable de TSH por este ensayo
se estima en 0,2 ⎧ IU / ml
CARACTERÍSTICAS DE PRESENTACIÓN
I. Precisión:
Comparación entre nuestro y Kits Disponibles Comerciales
Proporcionar los siguientes datos
N = 179
Coeficiente de correlación = 0,98
Pendiente = 0,886
Intercepción = -0,08
Media (Nuestros Kits) = 3.56
Media (kits de Abbott Lab) = 3,07
III. linealidad
Un suero del paciente se diluyó en serie con 0 ⎧ UI / ml en una norma
Estudio de linealidad. La recuperación promedio fue del 94,4%.
IV. Recuperación
Se mezclaron varias muestras de suero de pacientes de niveles conocidos de TSH y
Ensayado en duplicado. La recuperación media fue del 98,9%
V. Sensibilidad
La sensibilidad se define como la concentración de TSH que
Corresponde a la absorbancia que es dos desviaciones estándar mayor
Que la absorbancia media de 20 repeticiones del calibrador cero.
La concentración mínima detectable de este ensayo se estima en
ser 0,2 ⎧ UI / mL.
VI. Reactividad cruzada
Las siguientes inmunoglobulinas humanas se ensayaron para
Reactividad cruzada del ensayo:
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Existen algunas limitaciones del ensayo. Deberíamos dejar que nuestros clientes
Saber acerca de eso.
2. Al igual que con todas las pruebas diagnósticas, no debe
Basados en los resultados de una sola prueba, pero sólo deben ser
Después de que todos los hallazgos clínicos y de laboratorio hayan sido evaluados.
3. Los estudios han implicado
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