Virologia. Los rotavirus son virus ARN

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Conclusión

Se realizo la tecnica PAGE ouesto que es mas eficiente y especifica; con diferentes muestras de rotavirus en gel de poliacrilamida presentando 8 segmentos se dsRNAs genómicos e incluyéndolos en el grupo A.

Bibliografía

- Alberts B., Bray D., Lewis J., Raff M., Roberts K., Watson J.D. Biología Molecular de la Célula (1996) Omega.

- (2)Old R.W., Primrose S. B. Principios de manipulación genética (1987) Editorial Acribia S.A..

- Davidson GP, Townley RRW, Bishop RF, Holmes LH. Importance of a new virus in acute sporadic enteritis in children. Lancet 1975 242-245.

- Ayora G., Determinacion de serotipos vp4 y vp7 de rotavirus de humano mediante el uso de anticuerpos monoclonales. 1998. Rev. Biomed.

Anexo

1. Para preparar una solución de revelado que se emplea durante la tinción argéntica se requiere preparar una solución de NaOH a las siguientes concentraciones: 10 M, 8 M, 6 M y 2 M. Con el fin de determinar la estabilidad del reactivo durante diferentes períodos de tiempo. Determine cuantos mililitros de cada solución serán necesario para preparar una concentración de NaOH a 0.75 M en un volumen de 100 ml.

2. En una solución que se emplea para fijar el material genético durante la tinción de nitrato de plata se emplea ácido acético al 99% y alcohol etílico absoluto (98%). Si se requieren 100 ml de la solución de fijación en una concentración de 0.5% de ácido acético y 10% de etanol, determine cuantos mililitros son necesario para preparar dicha solución.

3. Qué cantidad en gramos se requiere para preparar 200 ml de la solución Tris-base 0.5 M.

Cuestionario

1. Determina el papel de cada una de las soluciones utilizadas durante la extracción de RNA por el método de fenol/cloroformo.

-Lisis: rotura de los tejidos y liberación de los ácidos nucleicos.

-Fenol: desnaturaliza las proteínas contaminantes de la muestra. Se usa para eliminar la proteínas (proteasas, nucleasas...); disminuye el rendimiento de la PCR a concentraciones del 0,2% y al 0,5% la inhibe completamente.

-Cloroformo: permite la separación de 2 fases; el ADN queda en la fase acuosa y en la fase orgánica quedan las proteínas y otros contaminantes.

-Etanol e isopropanol: precipitan los ácidos nucleicos. Tienen efectos inhibitorios a concentraciones superiores al 1%. (2)

2. Menciona otros métodos de purificación de ácidos nucleicos.

-Extracción Fenólica de proteínas Fenol (cáustico y corrosivo) -Cromatografía de intercambio iónico

-Cromatografía de intercambio aniónico -Cromatografía en columna -Cromatografía de adsorción

-Adsorción de DNA a sílica -Partículas magnéticas. (3)

3. ¿Por qué durante la tinción de nitrato de plata se lleva a cabo un paso fotosensible?

Este tipo de tinción es importante especialmente para revelar la ubicación de proteínas y ADN. La tinción con plata fue introducida como un procedimiento extremadamente sensible para detectar pequeñas cantidades de proteínas en geles. Las partículas de plata metálica se depositan en las fibras de reticulina sensibilizadas y son fácilmente observables en los preparados microscópicos.

4. Mencione otros métodos de cuantificación de material genético y la importancia de su calidad.

La PCR permite detectar la presencia de una sola secuencia de ADN presente en una muestra por lo que deben extremarse las medidas de bioseguridad en la manipulación de las muestras, evitando la contaminación cruzada y por lo tanto emitir falsos positivos.

La técnica de ELISA detecta o mide la cantidad de proteína de interés en una muestra que puede contener otras muchas proteínas diferentes. (4)

5. Menciona una técnica de biología molecular que se podría utilizar una vez obtenido el material genético purificado.

6. ¿Cuál es el nivel de bioseguridad del virus Influenza A y Rotavirus?

GRUPO DE RIESGO 3 (GR3): Microorganismos que representan riesgo elevado para el individuo y escaso para la comunidad; usualmente causan enfermedades serias a humanos y animales que resultan en importantes consecuencias económicas, la diseminación no es ordinaria y depende del contacto casual de un individuo a otro, puede haber disponibilidad de medidas preventivas y terapéuticas eficaces, por ejemplo agentes como; Micobacterium tuberculosis. M. bovis, M. leprae, Histoplasma capsulatum, virus de la Influenza incluyendo HPAI ( H7 y H5), virus del Nilo, entre otros.(1)