EXTRACCIÓN CASERA DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE CÉLULAS ANIMALES

EXTRACCIÓN CASERA DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE CÉLULAS

ANIMALES

Guerra- Rojano R1; Palomino- Narvaéz AC1; Ortiz-García DC1 y Cantero- Peralta V 1

1Departamento de biología, Facultad de educación y ciencias. Universidad de Sucre.

Resumen

Para la extracción de los ácidos nucleicos de una muestra de tejido animal, se utilizaron métodos como filtración, decantación, y centrifugación. Para esta práctica se inició con la preparación de la solución de cloruro de sodio y la lisis de las paredes celulares del fragmento de hígado. Estás dos soluciones se mezclaron y se le añade el detergente líquido o shampoo, este se dejó en reposo para ir homogeneizando las fases. Se realizaron dos procesos de separación de fases uno en el cual se centrífugo y el otro al aire libre. obteniendo en ambos procesos un sobrenadante al cual se le agregó etanol frío, dónde observamos el sobrenadante que correspondió a los ácidos nucleicos del hígado de pollo.

Palabras clave: Células, extracción, animal, hígado

Introducción 

Los ácidos nucleicos son un tipo importante de macromoléculas presentes en todas las células y virus. Las funciones de los ácidos nucleicos tienen que ver con el almacenamiento y la expresión de información genética (Lawrence C.). La molécula de ADN consiste en dos cadenas que se enrollan entre ellas para formar una estructura de doble hélice. Cada cadena tiene una parte central formada por azúcares (desoxirribosa) y grupos fosfato. Enganchado a cada azúcar hay una de las siguientes 4 bases: adenina (A), citosina (C), guanina (G), y timina (T). Las dos cadenas se mantienen unidas por enlaces entre las bases; la adenina se enlaza con la timina, y la citosina con la guanina. La secuencia de estas bases a lo largo de la cadena es lo que codifica las instrucciones para formar proteínas y moléculas de ARN (Christopher P.). Nuestro objetivo principal es extraer estos ácidos nucleicos de forma casera para ello es necesario realizar una lisis de las paredes celulares de tal forma que las células se roturen para separar el núcleo, además de la envoltura nuclear para liberar su contenido. Agentes como el detergente líquido o shampoo, al igual que el etanol se utilizan como desnaturalizantes de proteínas y disolvente de lípidos.  Es necesaria la centrifugación de la solución ya que se obtienen dos fases: una orgánica y una acuosa, separadas por una interfase de proteínas desnaturalizadas; en la fase acuosa se encuentra el ADN.

Materiales y Métodos

•  Se realizaron los respectivos cálculos para conocer la cantidad necesaria de NaCl utilizada para preparar la solución de NaCl 2M
• En un vaso pequeño de vidrio, Se preparó usando agua de bolsa 25 ml de NaCl 2M a la cual se le agregaron 2,92 g de NaCl y se mezcló hasta homogeneizar
• Luego se tomó un pequeño fragmento de hígado de pollo al cual se le realizaron múltiples cortes con ayuda de un cuchillo de mesa.
• Posteriormente el fragmento de hígado se introdujo en un mortero al cual se le agregaron 20 ML de agua en bolsa y se maceró hasta obtener en lo posible una lisis total. Se dejó en reposo durante algunos minutos para que las partículas más grandes se precipitaran al fondo del recipiente. Luego se filtró el líquido con ayuda de una gasa y colador en otro recipiente de vidrio.
• A continuación, se determinó el volumen de contenido del sobrenadante con ayuda de una jeringa (20ml) y fue depositado en otro recipiente de vidrio. Luego se añadieron 20 ml de la solución de NaCl 2M, a esta solución se le añadió 2 ml de jabón líquido y se dejó en reposo durante 10 min aproximadamente.
• Luego está mezcla fue añadida a un recipiente bien tapado y se introdujo en la centrífuga de la lavadora. Se centrifugó por aproximadamente 5 minutos. De igual forma se realizó otra prueba dónde está mezcla fue dejada en reposo durante 10 minutos.
•  Una vez transcurrido el tiempo se tomó con ayuda de una jeringa el sobrenadante y fue depositado en otro recipiente de vidrio, a este se le agregó de forma cuidadosa por la paredes del recipiente el etanol que se encontraba en el refrigerador.
• Se deja en reposo y se observan los resultados.

Resultados

Se requería preparar 25mL de solución salina 2M, para el cálculo se utilizaron las fórmulas:

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Ya que para encontrar los gramos se necesita la cantidad de moles:

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por consiguiente, para hallar los gramos se despeja la fórmula de peso molecular (teniendo en cuenta que el peso molecular del Cloruro de sodio es de 58,44gr/mol):

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En la figura 1 podemos observar la lisis del hígado de pollo

En la figura 2 podemos observar la solución con jabón líquido