Kio bioquimica

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Las enzimas también pueden utilizarse como sistema de marcaje alternativo a la radiactividad, por ejemplo produciendo color o luminiscencia al suministrarle un sustrato adecuado.

Métodos inmunológicos

La diferencia entre todas las proteínas radica en su configuración tridimensional, que es reconocida por los anticuerpos. Es necesario un sistema de detección posterior a la reacción inmunológica

Métodos de hibridación

Los ácidos nucleicos son difíciles de determinar por las técnicas anteriores. Difieren en la secuencia de nucleótidos. Se utilizan sondas, o fragmento de ADN complementario a un segmento de un ácido nucleico determinado, para realizar el reconocimiento específico. También en este caso es necesario un sistema de marcaje que permita la cuantificación del ácido nucleico.

Valoración de los métodos analíticos:

Viabilidad de un método: Hace referencia a la posibilidad de llevarlo a cabo, en función de sus problemas de seguridad, el tiempo de procesamiento de las muestras y la disponibilidad de instrumentación adecuada.

Precisión y exactitud: permiten medir por un lado la concordancia en la repetición de las medidas, y por otro, lo correcta que es la determinación, es decir, lo próxima que está al valor real.

Sensibilidad y especificidad: la sensibilidad hace referencia al límite de detección, la cantidad mínima de sustancia que puede ser cuantificada por ese método. La especificidad indica la capacidad para medir únicamente la sustancia de interés, sin interferencia de otras que se encuentren en la muestra. Si se usa un método demasiado sensible el resultado es menos preciso, debido a que la muestra ha de diluirse con un factor de dilución muy grande, por lo que pequeños cambios en la lectura del método se traducen en grandes cambios en la concentración final.

Extracción y purificación de moléculas biológicas

La extracción supone un tratamiento mecánico del tejido en un medio líquido tamponado. La homogenización puede ser total (tratamiento enérgico) o limitada (tratamiento suave).

Para la homogenización total se emplean morteros de cerámica, mezcladores de cuchillas, como batidoras, o bien homogenizadores de émbolo, empleados con cultivos celulares o para mejorar la extracción realizada con los sistemas anteriores. Los politrones combinan la rotación de cuchillas con la creación de vacío y ultrasonidos. Dan extractos muy finos.

La homogenización limitada se consigue mediante ensayo y error. Se ajustan las condiciones para obtener el rendimiento deseado. Requiere una puesta a punto.

Para obtener células a partir de un tejido se emplea la digestión enzimática, por ejemplo para obtener protoplastos a partir de tejido vegetal (celulasa). Es un proceso más lento y más caro que la homogenización.