Cultivo in vitro Tocte.

...

Primera siembra:

PRODUCTO

TIEMPO

Agua con detergente

10 minutos

Alcohol 70%

10 minutos

Vinagre 10% (v/v)

10 minutos

Hipoclorito de sodio 3% (v/v)

5 minutos

Agua estéril

10 minutos

Segunda siembra:

Debido a que se cambiaron los explantes el protocolo de desinfección también cambio.

PRODUCTO

TIEMPO

Agua con detergente

10 minutos

Alcohol 70%

10 minutos

Vinagre 50% (v/v)

10 minutos

Hipoclorito de sodio 2 % (v/v)

5 minutos

Agua estéril

10minutos

Las hojas y yemas fueron cortadas bajo el agua para disminuir la fenolización.

Tercera, Cuarta y Quinta siembra:

PRODUCTO

TIEMPO

Agua con detergente

10 minutos

Alcohol 70%

10 minutos

Benomil (Fungicida) 1% (v/v)

3 minutos

Hipoclorito de sodio 30% (v/v)

5 minutos

Vinagre 50% (v/v)

10 minutos

Agua estéril

10 minutos

Las hojas y yemas fueron cortadas bajo una solución de agua con limón 50% (v/v) para disminuir la fenolización.

3.4 Medios de Cultivo

Se preparó 3 medios de cultivo bajo las mismas condiciones, se los esterilizó, y se dispensó en contenedores previamente esterilizados. Los medios realizados fueron: Papá, Camote y la combinación de los dos. El proceso empleado fue el siguiente: Cocinar 500 gr de cada tubérculo con 500ml de agua, respectivamente, luego mezclar con 30 gr de gelatina sin sabor hasta disolver completamente. Posteriormente, se filtra y se esteriliza para luego dispensar en los contenedores. En las siembras 2, 3, 4 y 5 se adicionaron colorantes de repostería azul, rojo y verde y carbón activado, respectivamente. En la siembra 4 y 5 se adicionó ácido cítrico para evitar la fenolización de los explantes, a una concentración de 15% g/ml.

4. Resultados y Discusión

Los datos fueron analizados por el Método de Kruskal Wallis, ya que son datos no paramétricos.

En la Tabla 1 (Ver Anexos), se puede observar que hay diferencia significativa en el tratamiento Yema en medio de cultivo Mixto, esto en la siembra 1, 2 y 3, en las cuales se obtuvieron menos contenedores contaminados por hongos. De la misma manera el tratamiento de Hoja en medio de cultivo a base de Camote presento diferencia significativa en la siembra 1, 4 y 5 en donde se obtuvo menos contenedores contaminados por hongos.

En la Tabla 2 (Ver Anexos), se puede observar que hay diferencia significativa en la siembra 2, en donde los contenedores con hojas o con yemas sembrados en los tres diferentes tipos de medios de cultivo, en general fueron los que menos contaminación por hongos presentaron.

4.1 Contaminación bacteriana y fúngica

En todas las siembras realizadas se obtuvo contaminación, sin embargo la contaminación bacteria se presentó en menos contenedores al comparar con la contaminación fúngica. La mayor incidencia de contaminación bacteriana fue en el tratamiento Yema/ Papa y en la siembra 3, pero estadísticamente no existe diferencia significativa; mientras que en la contaminación fúngica se observa diferencia significativa con los tratamientos Yema/ Mixto y Hojas/Camote, siendo estos los que presentan menor contaminación fúngica y el tratamiento Yema/Camote y siembra 5 con un mayor índice de contaminación.

Según los resultados obtenidos, el tratamiento Yema/ Mixto y Hojas/Camote, son los más aptos para ser empleados en la micropropagación de Juglans neotropica.

Rodríguez et al, (1989) indica que la reproducción clonal del nogal adulto mediante cultivo in vitro presenta serias dificultades. Tanto en el cultivo de yemas de árboles adultos como de jóvenes brinzales, la desinfección de los explantos es relativamente sencilla, se consigue a partir de etanol al 70% y NaClO al 1%. El problema surge ante la imposibilidad de eliminar los contaminantes endógenos que se presentan en el 100% de los ejemplares estudiados, por esta razón no se logro eliminar por completo la contaminación.

4.2 Fenolización de explantes:

De acuerdo a los resultados obtenidos se puede observar que el tratamiento Hoja/ Mixto ha sufrido mayor oxidación ya que adopto un valor de 0,6926, el tratamiento que ha sufrido de menor oxidación fue Yema/ Camote con un valor de 0,1632, Según (Troxler, S., 2000), el camote, es un tubérculo con alto contenido de vitaminas A y C por lo que contiene propiedades antioxidantes ya que tanto el beta-caroteno como la vitamina C son poderosos antioxidantes que eliminan los radicales libres de las plantas lastimadas. Además las yemas son explantes menos sensibles por lo que su trato es mucho más fácil. Sin embargo al comparar los casos estadísticamente no existe diferencia significativa. De acuerdo al número de siembra, la mayor oxidación se pudo observar en la siembra 5 con un valor de 0,9092, Según (Alvaro, A., 2009), el daño que resulta de la producción