Esterilización en autoclave y coprocultivo

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*Se realizarán 4 estriados, de los cuales se harán uno por uno y tomaran la siguiente forma:

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1.-Esterilizamos el asa hasta qué quede rojo, dejamos enfriar por unos segundos (cuando ya no este rojo), lo ponemos en una parte del agar para qué no esté muy caliente.

2.-Se toma una pequeña porción de la muestra. 3.-Se hace el primer estriado.

4.-Se esteriliza el asa, se enfría y se hace el segundo estriado.

5.-Se esteriliza el asa de nuevo, se enfría y se hace el tercer estriado.

6.- Nuevamente se esteriliza el asa y se enfría, realizando así el último estriado, podemos observar qué es más pequeño qué los estriados anteriores.

*Se repiten los 6 pasos anteriores para las 3 cajas Petri con el agar:

- Agar Sangre.

- Verde Brillante.

- Salmonella Shigella.

7.-Cuando terminemos Con la siembra, esterilizamos el asa.

8.- Apilamos las cajas petri ya con el sembrado.

9.-encintamos, marcamos con fecha, mesa, grado y grupo.

10.-Lo ponemos a encubar en la estufa bacteriológica.

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Noviembre del 2014.

Observación de Colonias

*Es importante destacar que para todo el proceso debemos llevar cubre bocas, y guantes para el manejo de la muestra, así como trabajar en área estéril.

Examen macroscópico.

AGAR

FORMA

OPALENCIA

DIAMETRO APROXIMADO

Verde brillante

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Umbonada, circulares

Verde pastel,con blanco y forma viscosa poco transparente.

2mm

Salmonella Shigella

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Elevación convexa, plataforma, crecimiento de ambas bacterias.

Rosado salmón, shigella: transparente, pigmentación.

2mm

Agar sangre

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Irregular

pálido, transparente y blanco.

4mm

Examen microscópico

1.-Colocar una gota de solución salina en el porta objetos y esterilizamos el asa.

2.-seleccionamos una colonia, y con ayuda del asa, agarramos una muestra.

3.-realizamos el frotis.

Solución salina Asa de siembra[pic 28][pic 29][pic 30]

[pic 31][pic 32]

Frotis[pic 33]

4.-Fijamos con el mechero. 5.-Realizamos la tinción de gram:

- Cubrimos con cristal violeta 1 minuto.

- Enjuagamos cuidadosamente con agua.

- Cubrimos con Lugol 1 minuto.

- Enjuagamos con agua cuidadosamente.

- Cubrimos con alcohol-cetona por 30 segundos.

- Cubrimos con safranina 30 segundos.

- Enjuagamos.

- Dejamos secar.

6.-Observamos con objetivo 100x con aceite de inmersión.*Realizamos los 6 pasos anteriores con las 3 muestras del cultivo.

Resultados.

Agar sangre

Gram Positivo

Presencia de bacterias como: cocos, diplococos, estreptococos

Verde brillante

Gram negativo

Presencia de bacterias como bacilos, Cívica diplococos. *poca presencia de shigella.

Salmonella shigella

Gram positivo

Posibilidad de presencia de shigella.