Manejo integral de seguridad

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Bacillus thuringiensis, es un habitante normal del suelo, es un componente importante en el control biológico. Es una bacteria gram +, que se caracteriza por la producción de varias proteínas con capacidad insecticida al ser ingerido por larvas susceptibles específicamente del orden lepidóptera.3

Actualmente existen varios productos comerciales a base de B.t cuyo ingrediente activo insecticida es una proteína llamada deltaendotoxina, liberada durante la esporulación. Las deltaendotoxinas actúan sobre las microvellosidades del epitelio intestinal de larvas susceptibles, causándoles la muerte del insecto. El Bacillus thuringiensis es una buena alternativa debido a que es inocuo al hombre, animales domésticos, flora y fauna silvestre; es específico al estado larvario de lepidópteros, coleópteros y algunos dípteros perjudiciales, por último los costos de producción lo hace competitivo debido a los avances tecnológicos frente a los insecticidas químicos.

- La fermentación de B. thuringiensis se lleva a cabo normalmente a una temperatura entre 27°C y 33°C, siendo la temperatura óptima de 30°C; a 45° C se produce una disminución en la producción de este organismo. Además es esencial una fuente inductor para la producción de este, la literatura reporta que la Harina de Soya es la fuente preferida para el B.t debido a que ésta contiene 40% de proteínas.4

- Se realizó 4 evaluaciones distintas de 4 concentraciones diferentes de Harina de Soya residual para el patrón (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100ppm teniendo en cuenta los parámetros de temperatura, velocidad de agitación y pH.

MÉTODO DE LA INVESTIGACIÓN

Se desarrollará tres etapas y estas consisten en:

ETAPA 01: GABINETE INICIAL

- En la presente etapa se realizarán las siguientes actividades:

- Se realizaron los trámites respectivos para obtener el permiso donde se ejecutará el desarrollo del proyecto, Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de San Martín-Tarapoto.

- Recopilación de información bibliográfica de revistas, artículos, libros, etc. necesaria para el desarrollo del proyecto.

- Adquisición del cultivo de Bacillus thuringiensis, cedidos por parte del ICT, a través de la Universidad nacional de México.

- Diseño y elaboración de 4 reactores y de las paletas Rushton.

- Adquisición del cultivo de Bacillus thuringiensis, cedidos por parte del ICT, a través de la Universidad nacional de México.

- Diseño y elaboración de 4 reactores y de las paletas Rushton.

ETAPA 02: LABORATORIO

En la presente etapa se realizarán las siguientes actividades:

- Preparación y esterilización de los materiales a utilizar, incluido los 4 reactores.

- Reactivación del Bacillus thuringiensis con el Agar Nutritivo.

- Siembra del Bacillus thuringiensis en dos (02) placas petris por medio de la técnica de estría con el asa de drigalski.

- Preparación de Solución Salina Fisiológicamente Estéril (SSFE) en 3 tubos de ensayos de 10 ml y otro tubo de ensayo completamente vacío.

- De los tres (03) tubos de ensayos que contienen SSFE se agregó 10ml a dos (02) placas petris y del tercer tubo restante se colocó 5ml para cada placa, obteniendo como resultado 15ml en las dos (02) placas.

- A continuación se sembró de las dos (02) placas petris a un cuarto tubo de ensayo de 30ml y éste se llevó a esterilizar de 4°C a 5 °C.

- Se procedió a preparar el medio mínimo de Davis que fue de 600ml para los cuatro (04) reactores, obteniendo un total de 2400 ml del medio.

- Luego a ello se preparó el inóculo con el caldo nutritivo que fue de 300ml en cuatro (4) matraces y se agregó 2ml del cuarto tubo de ensayo a cada uno de los cuatro matraces y se llevó a esterilizar por 24 horas a 37°C.

- Se pesó la Harina de Soya residual que fue de 60ppm, 80ppm y 100ppm y se llevó a esterilizar en horno por 24 horas.

- A las 48 Horas transcurridas, con todos los materiales esterilizados se realizó el vertimiento de los 1200 ml del caldo nutritivo en los cuatro Bioreactores, igualmente se hizo con el medio mínimo de Davis que fue de 2400ml y se colocó las tres diferentes concentraciones (60,80 y 100) ppm más el patrón, el cual no contenía concentración alguna de la Harina de Soya Residual.

- Como resultado se obtuvo cuatro reactores, patrón, 60ppm, 80ppm y 100 ppm y se agitaron (0, 4, 8 y 24) horas, con una agitación de 400 RPM y 500 RPM.

- Luego se extrajo cuatro muestras de 30 ul (0,03ml) del patrón, 60ppm, 80ppm y 100 ppm y se llevó a observar el microscopio con la ayuda de la Cámara de Neubauer-improved para el recuento.

- Por último se realizó el recuento del patrón (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100ppm de Harina de Soya Residual en un microscopio de 10x por periodo de 3 días.

ETAPA N º 03: GABINETE FINAL

En la presente etapa se realizaran las siguientes actividades:

- Presentación, interpretación y sistematización de resultados.

- Elaboración del informe y presentación del mismo.

RESULTADOS.

Se probó las diferentes concentraciones de Harina de Soya Residual, patrón (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100ppm, de los cuales se obtuvieron los siguientes resultados; se realizó la evaluación de la agitación, temperatura y el control del pH y se observó que la agitación está relacionada a la velocidad que ejerce la Paleta Rushton en RPM.

Resultado de Análisis- cuarto ensayo (24 Horas). [pic 1]

Gráfico 5: Comparación de producción de B.thuringiensis-Cuarto ensayo del Patrón, 60ppm, 80ppm y 100 ppm a 24 horas.[pic 2]

Fuente: Elaboración Propia, 2016.

[pic 3]

Gráfico 6: Comparación de producción de Bacillus thuringiensis-promedio del Patrón (0ppm), 60ppm, 80ppm y 100 ppm.

Fuente: Elaboración