Reporte de Bioquímica Estructural

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Calculo de RF.

Cálculos.

Rf = [pic 3]

Rf= [pic 4]

Rf= [pic 5]

Rf= [pic 6]

Rf= [pic 7]

El Rf es la distancia recorrida por un soluto en la dirección del flujo del disolvente durante la separación.

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA.

Numero y color de los componentes separados

Observaciones.

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Se observa un color verde muy intenso, es la presencia de la clorofila b

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Al pasar éter de petróleo como separador comienza a disminuir el color verde, disminuye la clorofila b

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Se observa un color verde claro, con el cual identificamos a la clorofila a

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Color verde- amarillo, se observa la una mezcla de clorofila a y Xantofila.

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Se observa el término de la cromatografía con un color amarillo translucido lo cual indica la presencia del pigmento xantofila.

ANALISIS DE RESULTADOS.

El color verde tan uniforme presente en el extracto de espinacas que observamos tanto en la cromatografía en papel como en la columna es debido a la presencia de dos pigmentos llamados clorofila a y clorofila b .Estos pigmentos se encuentran en el interior de la células vegetales específicamente en una organelo llamada cloroplasto . Los cloroplastos son simplemente plástidos que contienen pigmentos clorofílicos. Los compuestos clorofílicos están ligados químicamente con las estructuras internas del cloroplasto (membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las clorofilas, observamos también en los cloroplastos otra clase de pigmentos amarillos: xantofilas.

En el segundo método por cromatografía se utilizo como separador el éter de petróleo. Este método se trata de una separación más fina de los pigmentos, y se basa en la absorción y solubilidad diferenciales de varias sustancias entre las que se incluyen los pigmentos..

[pic 8]

Homogenización

Para el homogenizado se hizo uso de un método mecánico, el mortero debido a que nuestra muestra se considera un tejido duro, ya que cuenta con una pared celular la cual es difícil de romper, y utilizamos como solvente etanol el cual es apropiado para extraer los pigmentos de la espinaca.

Centrifugación.

Al obtener el homogenizado utilizamos la centrifugación como método de separación de componentes a 2500 revoluciones por minuto, durante 10 minutos y así por medio de sus coeficientes de sedimentación, tamaño y densidad obtuvimos una mezcla de 2 fases una clara superior que contiene los pigmentos que deseamos identificar llamada sobrenadante, y una pastilla con componentes de mayor peso molecular, que para esta práctica no utilizamos.

Cromatografía en papel

En esta parte utilizamos la cromatografía en papel por medio de una fase estación.10aria de celulosa (papelfiltro) y una fase móvil de una mezcla de disolventes de éter de petróleo-acetona-benceno (85:5:10).

La clorofila es el pigmento verde común a todas las células fotosintéticas y absorbe bien en la región del rojo y muy poco en la zona verde del espectro visible. Las plantas que contienen clorofila son verdes porque la luz verde se refleja, no se absorbe.

Estos pigmentos, no son solubles en agua, pero pueden extraerse con solventes orgánicos cuando las células que los contienen se rompen.

Al ejecutar la cromatografía en papel podemos diferenciar colores distintos a lo largo de nuestra placa cromatografica, los cuales son distintos pigmentos que se encuentran dentro de la espinaca, la muestra color verde más intensa y lejana de la placa está dada por la clorofila b, la siguiente macha consistente de color verde-azul se debe a la clorofila a, después tenemos unas manchas de color amarillas que están dadas por los carotenos y xantofilas, las cuales podemos decir que tienen la menor afinidad con la mezcla de disolventes.

Cromatografía en columna.

Empacamos la columna con sacarosa la cual es la fase estacionaria en nuestra cromatografía y colocamos el éter para humedecer la columna, después se agregó la muestra que salió del centrifugado y podemos ver como los colores bajan a través de nuestra columna cromatografíca.

Los pigmentos con un coeficiente de distribución mayor como los son clorofilas, fueron las primeras muestras que obtuvimos con un color verde intenso, después carotenos y xantofilas que se distinguen por su coloración amarillenta.

Conclusiones

Con base a los objetivos de la práctica, llevamos a cabo métodos de estudio para un muestra de espinaca, homogenización mecánica con mortero para una muestra con pared celular, después para un separación de componentes utilizamos el centrifugado donde pudimos especificar aún más los pigmentos a estudiar, después utilizamos un 2 métodos cromatograficos, uno en columna que nos dio resultados cualitativos y uno en capa fina que nos dios tanto resultados cualitativos como cuantitativos por medio del cálculo del Rf.

Fundamentados los métodos, solo aplicamos algunos aspectos técnicos de cuidado como calibración en los tubos de la centrifuga, evitar que se fracture la columna cromatografica, y la aplicación dela muestra en la croamtografia de capa fina, aspectos técnicos que no parecen de gran importancia pero nos evitan repetir procesos si se hacen bien.

Bibliografía