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Homogeneización del tejido: se basa en romper las uniones entre las células, de esta manera se facilita la interacción con las soluciones de lisis que ayudan a liberar el material genético, se pueden realizar 2 tipos de homogeneización

Enviado por   •  1 de Marzo de 2018  •  Apuntes  •  375 Palabras (2 Páginas)  •  164 Visitas

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pregunta 4:

como se prepara un DNA plasmídico:

  1. se realiza un cultivo de bacterias.
  2. se toma una muestra y se adiciona en un tubo eppendorf, se realiza una centrifugación y se retira el sobrenadante.
  3. se realiza una lisis alcalina sobre las bacterias con (NaOH, SDS).
  4. se realiza una neutralización con acetato potásico.
  5. nuevamente se hace una centrifugación (se observa un precipitado blanco)
  6. en el sobrenadante se encuentra el DNA plasmídico, se retira y se adiciona en un nuevo tubo de ensayo.
  7. Se añade 1 ml de etanol y se realiza una separación por centrifugación.
  8. se retira el sobrenadante y se trabaja con el precipitado
  9. Se disuelve el precipitado en agua destilada con ribonucleasa A.
  10. el extracto obtenido es el DNA plasmídico aislado

pregunta 5:

  1. recolección de la muestra de levadura
  2. homogeneización del tejido: se basa en romper las uniones entre las células, de esta manera se facilita la interacción con las soluciones de lisis que ayudan a liberar el material genético, se pueden realizar 2 tipos de homogeneización
  • homogeneización mecánica
  • homogeneización química

  1. Separación de proteínas y lípidos: se separa el ADN de proteínas y lípidos al usar solventes orgánicos y realizar diferentes centrifugaciones, para esto se aprovecha la tendencia hidrofílica de los grupos fosfato para separarlos en medios acuosos, mientras que las proteínas y los lípidos se separan en solventes orgánicos.
  1. Precipitación del ADN: se adiciona etanol y soluciones con concentraciones de iones de sodio o amonio que se unen a los grupos fosfato generando la precipitación del DNA. se realiza una separación por centrifugación y se elimina el etanol
  1. Redisolución del ADN: se hidratar el ADN para mantenerlo en solución usando agua destilada, se debe asegurar que el pH del agua no esté por debajo de 7

pregunta 6:

como se pueden concentrar muestras de DNA:

  • la forma más eficaz y usada de concentrar DNA clásicamente es por medio de la precipitación, usualmente se usa etanol y si se desea se adiciona un catión, de esta manera es posible precipitar el DNA y separarlo por centrifugación, el etanol se retira como la fase acuosa y el DNA se mantiene en forma de precipitado luego  usando agua u otro solvente en el que se solubilice se adiciona el volumen deseado para generar una solución más concentrada  

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