PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UN FLAVONOIDE (RUTINA)

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Química Bioorgánica

Trabajo Práctico N  °2 -2020-

PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UN FLAVONOIDE (RUTINA) 

Profesor: Caminos Daniel

Alumnos: Iturre Rodrigo (rodrigo.iturre@mi.unc.edu.ar)        
             Valdivia Enzo (enzo.valdivia.368@mi.unc.edu.ar)

Comisión: 2

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El siguiente trabajo se centra en el análisis y comparación de 4 informes de años anteriores del práctico de laboratorio N° 4 que se basó en la purificación, caracterización y cuantificación del flavonoide rutina presente en una muestra impura mediante cromatografía y espectrofotometría.

INTRODUCCIÓN

Rutina (quercetin-3-rutinosido) es un rutósido que pertenece a la categoría de los flavonoles y estos, a su vez, pertenecen al grupo de los flavonoides. Su nombre deriva de la planta de la que se sintetizó por primera vez, la ruda o Ruta Graveolens L. [1]
        La rutina tiene propiedades y beneficios para la salud. Actúa regulando el sistema inmunitario, es capaz de reducir las alergias, así como también, ofrecer resistencia contra infecciones bacterianas y víricas. [1]

Los flavonoides presentan una estructura básica que comprende dos anillos aromáticos unidos entre sí  mediante una cadena carbonada de tres átomos, con uno o más grupos hidroxilo. Debido a la presencia de dobles enlaces conjugados estos compuestos son capaces de presentar fluorescencia frente a la luz UV. [2]

Para el desarrollo del siguiente práctico se trabajó con los informes de: Parodi Pedro y Gomez Ignacio (2017), Borja Jonatán y Piccolo María Belén (2018), Bravo, José Leonardo y Ernst, Sofía Carolina, Casajús Sofía y Latorre Juan Cruz, (2019 ambos)

OBJETIVOS

• Realizar un análisis de los informes seleccionados comparando e identificando  errores comunes, resultados, ventajas y/o desventajas de los cambios realizados durante los años.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Obtención del extracto vegetal: 

A partir de una muestra vegetal, Jaborosa kurzii, los docentes de la materia realizaron la extracción del principio activo, rutina, con etanol por lixiviación. Inicialmente, se procedió a secar y moler la muestra vegetal para luego someterla a lixiviación, de la cual se obtuvo una solución etanólica y un extracto vegetal, siendo este último descartado. A esta solución etanólica se la dejó en condiciones de sequedad para aumentar la concentración del principio activo. Para extraer las distintas sustancias liposolubles se mezcla el concentrado de rutina con hexano. La fase hexanólica se descarta y a la fase alcohol:agua se le agrega cloruro de metileno para extraer los metabolitos de mediana polaridad logrando extraer en fase acuosa a la rutina debido a su alta polaridad. Una vez obtenido el compuesto de interés en solución se concentró a sequedad.  

2. Purificación de la muestra problema de rutina: 

En todos los años la preparación de la muestra problema se llevó a cabo de forma similar, pesandose una determinada cantidad de rutina contaminada con una impureza desconocida y se disuelve con el menor volumen posible de metanol.

Para la purificación de las muestra se utilizaron diferentes técnicas. En el año 2019 se realizó una cromatografía en placa delgada preparativa usándose como fase estacionaria placa de sílica gel 60F254 y como fase móvil 50 mL de metanol. Luego de realizar la cromatografía y secar la placa se observa, a simple vista, una sola banda amarilla en el frente de solvente pero cuando se irradia con luz UV-365nm se observan dos, una perteneciente a la rutina y la otra a su impureza. Luego de identificar cada mancha se raspa con una espátula cada una de ella y se las coloca en un beaker con metanol a macerar. Cada solución se recoge en distintos matraces.

Tanto en el año 2017 como en el 2018, la purificación se llevó a cabo mediante cromatografía en papel utilizando como fase móvil ácido acético 15% en agua destilada. Una vez finalizada la cromatografía, secada la fase móvil y revelada en UV, se cortó la parte superior donde se observaba una mancha amarilla y se colocó también, a macerar con metanol.

Con este breve análisis se puede observar las modificaciones que se fueron realizando a lo largo de los años en materia de técnicas de purificación de muestra problema de rutina.  

3. Cuantificación:

              Curvas espectrales y curvas de calibración

A continuación se muestran las diferentes curvas espectrales obtenidas de las [pic 3]experiencias de los años 2017, 2018, 2019.

[pic 4]Figura nº 2: curva de calibración, año 2017 [6]                              Figura nº1 : curva espectral del año 2017 [6]

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Figura nº4: Curva de calibración del año 2018 [5]                                Figura nº3 : curva espectral del año 2018 [5]

[pic 7][pic 8]Figura nº5 : curva espectral del año 2019 [4]                                Figura nº6 : curva de calibración del año 2019 [4]