Separar los pigmentos de una muestra vegetal, por medio de técnicas cromatográficas.

...

Puede desecha el residuo sólido.

- Cromatografía en columna (CC): Para el extracto con solvente orgánico

En un vaso de precipitados de 50,0 mL adicione entre 3 y 5 gramos de la fase estacionaria que va a utilizar y luego adicione 10 mL del solvente o mezcla de solventes que usará como fase móvil. Agite suavemente.

Coloque en forma adecuada la pipeta Pasteur en una pinza para refrigerante, introduzca una pequeña porción de lana de vidrio al interior para hacer un tapón no muy compacto ni muy alto al fondo de la pipeta. Adicione lentamente la suspensión de la fase estacionaria en el solvente de estudio con un gotero de vidrio y cuide que no se formen burbujas al interior de la columna; recoja en solvente que sale de la columna en un vaso de precipitados, parcialmente tapado con papel alumnio. Llene la columna con la fase estacionaria HASTA 0,5cm por debajo del nivel superior. No deje que la columna se seque, manténgala húmeda con el solvente que usará como fase móvil.

Coloque 2 a 5 gotas del extracto con el solvente orgánico en un vidrio de reloj y déjelo secar al medio ambiente o en baño maría, luego adicione 5 gotas de la fase móvil, disuelva los pigmentos y coloque las cinco gotas en la parte superior de la columna sobre la fase estacionaria previamente despejada de fase móvil. Deje que los pigmentos se introduzcan en la columna y luego elúyalos adicionando más fase móvil a la columna hasta que se observe separación o un pigmento coloreados llegue al final de la fase estacionaria. No deje que los pigmentos se salgan de la columna, tapando la parte superior e inferior con Parafilm. Observe.

- Cromatografía en capa delgada (CCD):

Trace una línea con lápiz, a 1 cm de altura, en la lámina con la fase estacionaria adecuada; divida la línea en dos y en la primera porción adicione con un capilar dos gotas del extracto correspondiente (ver tabla 1) y en la segunda porción 6 gotas del extracto, deje secar al aire. Coloque la placa en la cámara de revelado en donde está la fase móvil, y debe sumergirse por debajo del punto de siembra del extracto; la mezcla de solventes correrá sobre la lámina por capilaridad y se retirará la placa cuando la fase móvil esté a 1cm de llegar al nivel superior. Deje secar a la atmósfera y con un lápiz indique la posición de los pigmentos sobre la placa. Observe.

Tabla No 1.

EXTRACTO VEGETAL

PLACA SILICAGEL

PLACA CELULOSA

SOLVENTE ORGANICO

SI

NO

ETANOLICO

NO

SI

- TABLA DE DATOS

En la tabla de datos debe tener en cuenta el sistema de solventes que utilizó para cada una de las cromatografías y la descripción de la separación de los pigmentos, si esta se llevó o no acabo.

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

SISTEMA DE SOLVENTES

SILICA GEL

ALUMINA

Tolueno:Metanol

(9:1)

Acetona:metanol

(9:1)

Acetona:cloroforme:metanol

(7:2:1)

CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA

SISTEMA DE SOLVENTES

SILICA GEL

CELULOSA

Tolueno:Metanol

(9:1)

X

Acetona:Metanol

(9:1)

X

Acetona:cloroformo:metanol

(7:2:1)

X

Etanol al 96%:Agua

(1:1)

X

Etanol al 96%:agua

(1:2)

X

5. CROMATOGRAFIA HPLC

Atienda las explicaciones del monitor encargado del cuidado de equipo. El método utilizado es una separación por HPC en un equipo Hitachi.,el solvente es ( H2SO4 5Mm) que varía en composisicón desde 0% hasta 100% de mezcla de 0 a 28 minutos, el con flujo del solvente es de 0.5mL/min. La detección de los compuestos alcohólicos se realiza a 270 nm con un detector LaChrom L- 7400 de Merk- Hitachi

Cantidad de muestra para el análisis son 60 µL.

La curva de calibración está preparada entre 0 y 6% de etanol, tome los datos de altura de pico, para hacer los cálculos.

La muestra problema puede ser una bebida alcohólica, prepare por dilución un 1 mL de muestra que contenga aproximadamente entre 2 y 4 % de alcohol.

Si la bebida seleccionada tiene entre 2 y 4% de etanol no es necesaria la dilución

Inyecte la muestra y espere 28 minutos hasta obtener el cromatograma. (Para este método el tiempo de retención del etanol esta entre 25.6 y 25.75 min)

Columna de intercambio ioníco Aminex HPX87H. tamaño de poro 300mm X 7.8mm

Registre el número de señales de muestra, los tiempos de retención, compare con la curva de calibración y determine la concentración del etanol presente en la muestra.

- BIBLIOGRAFÍA.

- Harvey, D. Química analítica moderna. 2002. McGraw Hill, primera edición, España.

- Ramírez, I.B; Gaviria, L.E; Young, S.T y Morales, A.L. Química analítica instrumental. 1989. Editorial Hispanoamericana, Universidad abierta y a distancia, UNISUR. Bogotá.

PREINFORME