ANALISIS DE LAS CONDICIONES OPTIMAS EN LA QUE LA AMILASA SALIVAL REACCIONA CON VELOCIDAD MAXIMA Y AFINIDAD HACIA EL ALMIDON

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Después de 1 minuto se depositó cinco gotas del tubo 3 en una concavidad de la placa de porcelana en la que previamente había depositado dos gotas del reactivo del Lugol y se observó el color producido. Se repitió el mismo procedimiento con los demás tubos. El pH óptimo para la α- amilasa corresponde a aquel tubo donde se obtuvo más rápidamente el color amarillo ocre. Debido a que no se observó este color en ninguno de los ensayos se repitió el procedimiento anterior, con todos los tubos, cada minuto hasta que en una concavidad apareció el color amarillo ocre. Este fue el pH óptimo.

Concentración óptima de enzima

Se rotuló cuatro tubos de ensayo 1, 2, 3 y 4, se los deposito en un baño de agua a temperatura óptima y, sin sacarlos de allí, se agregó en su orden sin retirarlos del baño las sustancias que se indican a continuación:

Solución\Tubo

1

2

3

4

Almidón 0.5%

2ml

2ml

2ml

2ml

Amortiguador de pH óptimo

2.9ml

2.7ml

2.1ml

1.2ml

Amilasa salival

0.1ml

0.3ml

0.9ml

1.8ml

Tabla N°2. Indicador de sustancias que se agregó en el proceso de la concentración optima de enzima

Se realizó los mismos ensayos que para determinar la temperatura y el pH óptimos. Se encontró la concentración óptima de enzima.

Efecto de los iones metálicos pesados sobre la acción de la amilasa

Se rotuló tres tubos de ensayo amilasa, Hg++ y Pb++, se los depositó en un baño de agua a la temperatura óptima y se agregó en su orden:

Solución\Tubo

Amilasa

Hg++

Pb++

Almidón 0.5%

2ml

2ml

2ml

Amortiguador de pH optimo

3ml

2ml

2ml

HgCl2 1%

-

1ml

1ml

Pb(NO3)2

-

-

1ml

Amilasa salival

1ml

1ml

1ml

Tabla N°3. Indicador de sustancias que se agregó en el proceso denominado “Efecto de los iones metálicos pesados sobre la acción de la amilasa”

Se repitió el procedimiento de los casos anteriores y se determinó el efecto de los iones metálicos pesados sobre la amilasa.

Efecto de la concentración de sustrato

Se rotuló cinco tubos de ensayo 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 y 4.0. Se los deposito en un baño de agua a la temperatura óptima y, se agregó en su orden, almidón y amortiguador. Se dejó que estén a la temperatura óptima y luego solamente al primer tubo se le agregó la amilasa sin sacarlo del baño maría. Se agito sin sacarlo del agua y al cabo de 30 segundos se extrajo 3 gotas de la solución y se hizo la prueba con el lugol. Debido a que no cambio a rojo pardo, se esperó otros 30 segundos y se realizó el mismo procedimiento hasta que apareció el rojo pardo. Se tomó el tiempo lo más exacto posible. Se realizó el mismo procedimiento para los demás tubos, uno por uno.

Solución\Tubo

0.25

0.5

1.0

2.0

4.0

Almidón 0.5%

0.25ml

0.5ml

1.0ml

2.0ml

4.0ml

Amortiguador de pH optimo

4.25ml

4.0ml

3.5ml

2.5ml

0.5ml

Amilasa salival

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

0.5ml

Tabla N°4. Indicador de sustancias que se agregó en el proceso denominado “Efecto de la concentración de sustrato”

RESULTADOS:

Tabla1: efecto de la temperatura en la actividad enzimática de la α-amilasa

Tubo de ensayo

Volumen del sustrato (mL)

Temperatura

(0C)

α-amilasa (mL)

Coloración obtenida con el reactivo de lugol

0

0.5ml