ANEXO 1 COLECCIÓN DE MUESTRAS DE HECES

...

- La turbidez de la suspensión bacteriana debe ser igualada al estándar 0,5 del Nefelómetro de McFarland (lo que corresponde a aproximadamente 1,5 x 108 UFC/mL). Las suspensiones así ajustadas deben utilizarse como inóculo dentro de los 15 minutos siguientes.

4. Inocular la placa:

- Permitir que la placa de Agar Mueller-Hinton se caliente a la temperatura ambiente para que cualquier exceso de humedad se absorba dentro del medio. Agitar la suspensión del organismo para asegurarse que está bien mezclada. Sumergir un hisopo de algodón estéril en la suspensión. Remover el exceso de líquido del hisopo presionándolo contra la pared del tubo.

- Inocular la superficie del agar de Mueller-Hinton con el hisopo cubriendo toda la superficie del agar por estría cerrada. Girar la placa aproximadamente 60º y repetir el procedimiento de estriado. Girar otra vez la placa 60º y estriar con el hisopo la superficie por tercera vez, por último pasar el hisopo 2 ó 3 veces por la periferia del agar. Incubar el medio dentro de los 15 minutos siguientes después de haber estandarizado el inóculo.

5. Colocar discos de antimicrobiano:

- Retirar el contenedor de discos del congelador o del refrigerador. Antes de abrir el contenedor, permitir que los discos se estabilicen a la temperatura ambiente durante una a dos horas para minimizar la condensación y reducir la posibilidad de que la humedad afecte la concentración de los agentes antimicrobianos. Se pueden colocar hasta 5 discos en una placa de 100 mm de diámetro. Presionar cada disco firmemente para asegurar el contacto completo con la superficie del agar.

Tomar en cuenta la siguiente información sobre los discos de antimicrobianos:

- No usar discos después de su fecha de caducidad.

- No almacenar discos en un congelador libre de escarcha.

- Usar productos aprobados por la Administración de Drogas y Alimentos (FDA, por sus siglas en inglés).

- Use discos con el contenido especificado en los estándares del CLSI (Instituto de Estándares de Laboratorios Clínicos, por sus siglas en inglés).

- No reubicar un disco una vez que éste ha tocado la superficie del agar.

6. Incubar la placa:

- Invertir las placas e incubarlas.

- Para las bacterias poco exigentes, incubar en condiciones de aerobiosis a 35°C por 16–18 horas. En caso de tratarse de microorganismos fastidiosos tomar en cuenta las siguientes recomendaciones emitidas por el CLSI:

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7. Medir las zonas de inhibición

- Medir el diámetro del halo de inhibición con una regla o un calibrador.

- Al analizar Estreptococos en agar Mueller-Hinton con 5% de sangre de cordero, retirar la tapa y medir las zonas desde la parte superior de la placa.

- En caso de presentarse doble zona de inhibición medir la zona más interna.

8. Interpretar los resultados según la información emitida por el Instituto de Estándares de Laboratorios Clínicos.

ANEXO 6

PRUEBAS METABÓLICAS PARA IDENTIFICAR A BACTERIAS GRAM POSITIVAS

CADENAS DE COCOS GRAM POSITIVOS

PRUEBA DE LA CATALASA

- Con el asa de nicromio circular estéril, colocar en un portaobjetos la colonia seleccionada y añadir una gota de peróxido de hidrógeno al 3%.

RESULTADO

INTERPRETACIÓN

Burbujas

La catalasa está presente

No burbujas

La catalasa está ausente

HEMOLISINAS

RESULTADO

INTERPRETACIÓN

Zona transparente alrededor del crecimiento

Destrucción total de los glóbulos rojos: β- Hemólisis

Zona verdosa alrededor del crecimiento

Destrucción parcial de los glóbulos rojos: α- Hemólisis

Sin cambio en el medio

El organismo no ataca los glóbulos rojos

PRUEBA DESENSIBILIDAD A BACITRACINA (ANTIBIÓTICO DE IDENTIFICACIÓN)

RESULTADO

INTERPRETACIÓN

Zona transparente alrededor del antibiótico bacitracina

Sensibilidad al antibiótico, Streptococcus spp clasificado en el grupo serológico C de Lancefield

Crecimiento alrededor del antibiótico bacitracina

Streptococcus spp resistente al antibiótico

PRUEBA DE CAMP ( CHRISTIE, ATKINS, MUNCH-PETERSEN )

- Con asa de nicromio circular estéril, inocular en agar sangre preparado con eritrocitos ovinos o bovinos, una cepa β hemolítica de S. aureus en línea horizontal y líneas verticales del Streptococcus β hemolítico a identificar que queden a una distancia de 2mm.

- Incubar el medio a 35°C durante 24 horas en aerobiosis. No se recomienda la incubación en atmósfera de CO2 ya que la prueba puede inhibirse.

RESULTADO

INTERPRETACIÓN

Efecto en forma de flecha

Efecto sinérgico al interactuar el Factor CAMP del Streptococcus con la hemolisina β (esfingomielasa C) del S. aureus.

Identificación de Streptococcus agalactiae clasificado en grupo serológico B de Lancefield.

Sin formación de flecha

Factor