“CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y FACTORES QUE ALTERAN LA SOLUBILIDAD PROTEICA”

...

La solución obtenida al agregar el NaCl a la clara de huevo era traslúcida y contenía unas “tiras” translúcidas en el centro de la solución, después al filtrar la solución fue homogénea y traslúcida.

[pic 6]

Imagen 1. Pruebas de solubilidad para filtrado de huevo.

Muestra

Observaciones

1L HCl 2%

Sin cambio

-

2L Acetona

Solución turbia

++

3L (NH4)2SO4 saturado

Solución turbia

++

4L Detergente

Poco precipitado blanco

+

5L (Ebullición)

Abundante precipitado blanco

+++

Tabla 3. Pruebas de solubilidad para filtrado de leche.

[pic 7]

Imagen 2. Pruebas de solubilidad para filtrado de leche.

Simbología utilizada.

+=poco precipitado, ++= +++=abundante precipitado y - = no hay precipitado

3.Cuantificación de proteínas método de Biuret.

La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero).

No. tubo

1

2

3

4

5

6

7

8 (H)

C(mg)

0

0.1

0.3

0.5

1

1.5

--

1.1794

D.O(absorbancia)

0

0.02

0.068

0.224

0.212

0.258

--

0.223

Tabla 4. Cuantificación de proteínas.

Las soluciones para la curva patrón comenzaban de un color violeta muy claro a conforme la concentración aumentaba a violeta intenso (tubos 2-6), el tubo 1 fue la solución patrón y se observaba azul debido a que no hay proteína y solo tiene cobre (II).

[pic 8]

Imagen 3. Soluciones utilizadas para la construcción de la curva patrón.

Las soluciones obtenidas para el filtrado de clara de huevo y leche se muestran en la imagen 3, observándose que el filtrado de leche tuvo una coloración rojiza y con presencia de precipitado, por esta razón no se le leyó absorbancia y la yema de huevo tuvo una coloración violeta muy tenue

[pic 9]

Imagen 3.Soluciones del filtrado de leche (izquierda) y filtrado de clara de huevo (derecha)

CÁLCULOS Y GRÁFICOS

[pic 10]

Gráfico 1. Curva patrón de albúmina patrón a diferentes concentraciones.

El gráfico anterior muestra la curva patrón utilizada para determinar la concentración de albúmina en la clara de huevo.

El cálculo de proteína presentes en el filtrado de clara de huevo se hizo de la siguientes manera:

1.Tomamos la ecuación de la recta, debido a que nuestra curva patrón no fue lineal:

Y= 0.17772x + 0.0134

2. Despejamos x:

x=[pic 11]

3. Colocamos el valor de absorbancia obtenido para el filtrado de huevo (tabla 4):

x=[pic 12]

x= 1.1794mg/mL de albúmina

Cálculo de caseína en muestra de leche

Se obtuvieron 1.23g de caseína en 30mL de solución así que para el cálculo de caseína en la muestra se toma en cuenta la dilución que se hizo:

[pic 13]

Porcentaje de caseína

7.8 --------100%

2.46g----------x

x=2.46 x100/7.8

x=31.54% de proteína

ANÁLISIS DE RESULTADOS

- Cuantificación de caseína en leche

El agregar gotas de limón se hizo para disminuir el pH de la leche y así llegar al punto isoeléctrico de la caseína que de 4.73, y con esto poder precipitar a la caseína, la cual cuando precipitó se observó como unos grumos de color blanco.

La etiqueta de la leche decía que por cada 250 mL contiene 7.8g de proteína, por lo que si se tienen 2.46g de caseína esto representa el 31.54% de proteína total en la leche LaLa entera®.

- Separación de yema de huevo

Agregar NaCl a la clara de huevo es debido a que la albúmina se solubiliza (a este fenómeno se le denomina salting in)