Caracterización de una proteína que interviene en la formación de agregados en células ganglionares de nervio óptico

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RESULTADOS

Obtención tejido de nervio óptico y realización de microscopia para verificar la existencia de cambios en nervio óptico.

Se utilizaron 40 modelos con cataratas y se realizó una disección del nervio óptico para realizar la microscopia de las mismas muestras. En efecto en toda nuestra población se estableció una alteración similar en el nervio óptico (figura 2).

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Aislamiento de cúmulos de proteína debido a la exclusión por mayor tamaño.

Debido a que en nuestro sistema los agregados formados en las células ganglionares de nervio óptico se encuentran presentes en una gran cantidad procedimos a utilizar este método por el gran tamaño mostrado y en efecto en la obtención de nuestros resultado como mostramos un patrón similar para los 30 ejemplares (figura 3) con base a estos hallazgos podemos tener certeza que el fraccionamiento numero 3 tienen en mayor contenido a nuestra proteína más pesada para nuestro modelo control en este paso solo se obtuvo una alta absorbancia en la fracción 8 que podemos inferir .

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Figura 3 Cromatografía de filtración en gel. A) en la fracción 3 se puede inferir se encuentra nuestro aglomerado de peptido.

Determinación del peso molecular de nuestro péptido

Para determinar el aproximado peso molecular se realizó un SDS-PAGE y solo una banda de se puede visualizar con un peso de 40 kDa en comparación con el péptido β-amiloide se puede ver que existen diferencias respecto al peso 26kDa (figura 4).

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Espectrometría de masas MALDI-TOF MS/MS para obtener la secuencia del péptido

Con la muestra purificada de nuestro péptido

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Determinación de estructura por RMN

Con la suficiente muestra de proteína y teniendo ya purificada la banda de proteína se realizó RMN para la obtención de una posible estructura de la proteína y determinar alguna similaridad en cuanto a estructura de beta-cruzadas que se encuentran en las fibrillas amiloides.

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Con base en la idea de si el péptido aislado, presente en nervio óptico sean similares al péptido β-amiloide en células neuronales que causan los agregados de fibrillas realizamos un sobrelapamiento de estructuras para ver las posibles diferencias en tendencia a asociarse, además de tratar de entender la manera en cómo se realizan las interacciones entre nuestro péptido que puede conducir a la formación de nuestros agregado, hicimos una búsqueda de proteínas con una secuencia similar e identificar alguna posible función normal en la proteína