Correlación entre el volumen de la periodontitis apical determinado por análisis tomográfico computarizado de haz cónico.

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El procedimiento de segmentación y las mediciones volumétricas se hicieron mediante la localización de la rodaja en cada uno de los 3 planos (es decir, el plano axial, anteroposterior y buco-palatinas medidas; plano sagital, anteroposterior y medidas supero-inferior; y el plano coronal, supero-inferior y medidas buco-palatinas) en que las rebanadas se deben pasar a la región de alta dimensión de las lesiones periapicales (Fig. 1). Después de crear las medidas en los 3 planos, se determinó un polígono que abarca todo el límite de la lesión (con un margen de seguridad) para dar formato a la reconstrucción 3D de la imagen radiolúcida periapical en un umbral de 350 unidades Hounsfield. El umbral para la generación de volumen fue elegido sobre la base de un estudio piloto en el que se probaron diferentes opciones de unidad Hounsfield, con el valor más óptimo está estableciendo consensuada por radiólogo y endodoncista para representar mejor la lesión. Una segmentación 2D se realizó en los 3 planos para seleccionar el área radiolúcida, y los límites de la lesión se comprueba para saber si estaban dentro del polígono generado, con las correcciones se realizan siempre que sea necesario. A continuación, una reconstrucción en 3D de la radiotransparencia fue creado por la expansión de las áreas seleccionadas en las 3 rebanadas 3-dimensionalmente. Las fronteras del volumen seleccionado, se inspeccionaron en todas las rebanadas y corregidos cuando sea necesario. Por último, el '' volumen detectar '' se usa la opción del software para calcular automáticamente los volúmenes seleccionados en centímetros cúbicos. A continuación, el volumen fue convertido en milímetros bic Cu (Fig. 1).

Procedimientos de muestreo

Los archivos, instrumentos, y todos los materiales a utilizar en este estudio fueron tratados con radiación gamma Co60(20 kGy para 6 horas) para esterilización y la eliminación de endotoxinas preexistentes (EMBRARAD; Empresa Brasileira de Radiac¸~un o , Cotia, SP, Brasil). El método utilizado para la desinfección del campo operatorio se ha descrito previamente en otra parte. En pocas palabras, los dientes fueron aislados con un dique de goma. Las estructuras de coronas y de los alrededores fueron desinfectados con H2O2 al 30% (v / v) durante 30 segundos, seguido de NaOCl al 2,5% en el mismo período de tiempo y luego se inactivan con tiosulfato de sodio al 5%. La esterilidad de las superficies externas de la corona se comprobó tomando una muestra de hisopo de la superficie de la corona y las rayas que en placas de agar sangre, que luego se incubaron tanto aeróbica y anaeróbicamente.

Una preparación de la cavidad de acceso de dos etapas se hizo sin el uso de agua pulverizada, pero bajo riego manual con solución salina estéril / apirógena y mediante el uso de una fresa estéril / apirógena alta velocidad diamante. La primera etapa se realizó para promover una mayor eliminación de los contaminantes, incluyendo lesión de caries y la restauración. En la segunda etapa antes de entrar en la cámara de la pulpa, la cavidad de acceso fue desinfectado de acuerdo con el protocolo descrito anteriormente. La esterilidad de la superficie interna de la cavidad de acceso se comprobó como se describe anteriormente, y todos los procedimientos se llevaron a cabo asépticamente. Una primera toma de muestras de endotoxinas fue tomada por la introducción de puntos estériles / apirógenas de papel (tamaño # 15; Dentsply Maillefer, Ballaigues, Suiza) en toda la longitud del canal, el cual fue determinado radiográficamente, y se retiene en su posición durante 60 segundos para el muestreo. Inmediatamente después, la muestra se colocó en un vaso libre de pirógenos e inmediatamente suspendido en el agua 1 ml de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) de acuerdo con la dosis de endotoxina mediante el uso de la LAL cinético cromogénico (Lonza, Walkersville, MD) de ensayo. Este procedimiento de muestreo se repitió con 3 puntas de papel que se agruparon en un tubo estéril que contiene 1 ml de medio de transporte VMGA III (21) para el cultivo microbiano.

Procedimientos de endotoxinas

La cuantificación de endotoxinas (LPS) por la prueba Kinetic cromogénico LAL. El ensayo LAL cinético cromogénico (Lonza) se utilizó para la cuantificación de endotoxinas. La endotoxina de Escherichia coli se utilizó como estándar. Un control positivo (muestra canal de la raíz contaminada con una cantidad conocida de endotoxina) se incluyó para cada muestra para determinar la presencia o ausencia de agentes interferentes. Para el ensayo, 100 ml de agua apirógena (en blanco de reacción), 4 soluciones de endotoxinas estándar (0.005-50 unidades de endotoxina [UE] / mL), muestras de canal radicular, y controles positivos (cada muestra conducto radicular contaminada con una concentración conocida de endotoxina [ se añadieron 10 UE / ml]) a un 96 bien placa apirógena. Las pruebas se llevaron a cabo por cuadruplicado. La placa se incubó a 37 ○ C T 1 ○ C durante 10 minutos en un lector de QCL cinética, que se acopló a un microordenador por medio del software WinKQCL (Lonza). A continuación, se añadió 100 ml de reactivo cromogénico a cada pocillo. Después de que el inicio de la prueba cinética, el software controla continuamente la absorbancia a 405 nm en cada pocillo de la microplaca y automáticamente calcula el log / log de correlación lineal entre el tiempo de reacción de cada solución estándar y la concentración de endotoxina correspondiente.

Procedimiento de cultura

Determinación de recuentos de bacterias cultivables (procedimiento de cultivo). El método utilizado para procedimientos de cultivo en el presente estudio se había informado previamente en otro lugar (13). En pocas palabras, los medios de transporte que contienen las muestras del conducto radicular se agitaron a fondo durante 60 segundos (Vortex; Marconi, Piracicaba, Sao Paulo, Brasil). diluciones seriadas de 10 veces se hicieron hasta 10-4 en tubos con caldo fastidioso anaerobio (FAB; Lab M, Bury, Reino Unido). Cincuenta microlitros de las diluciones seriadas se sembraron en un 5% de sangre de oveja desfibrinada anaerobio exigente agar (FAA; Lab M) mediante el uso de esparcidores de plástico estériles a la cultura no selectiva anaerobios obligados y anaerobios facultativos.

Las placas se incubaron a 37 ○ C en atmósfera anaerobia durante un máximo de 14 días. Después de este período, unidades formadoras de colonias (UFC) se cuantificaron visualmente para cada placa.

Análisis estadístico

Los datos se escriben en una hoja de cálculo, y el software