Cromatografía en columna y capa fina

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ADSORVENTES Y SU PREPARACION

Adsorbentes

Se pueden obtener con pequeñas mezclas de sulfato de calcio (aumenta su adhesividad en la columna) y también como indicador fluorescente. El gel de sílice (de Merch y Cia) contiene sulfato de calcio como adhesivo.

La alumina es la que tiene propiedades adherentes del el de sílice, pero el grado de adsorción depende de su pH.

Preparación de adsorbentes

Se pueden preparar placas del gel de sílice, haciendo una lechada de 30 g de sustrato con 60 ml de agua destilada en un mortero y batiendo continuamente durante un minuto. Esta cantidad puede cubrir 5 placas de 20*20 cm.

Preparación de placas

Todas las placas de vidrio deben ser lavadas escrupulosamente mediante lavado con ácido y justamente antes de usarse, se frota la superficie con acetona para quitar cualquier grasa que pueda tener.

Se introducen las placas en la lechada, dejando una capa delgada de aproximadamente 1-2 mm de grosor.

Activación de las placas

Antes de que se puedan usar las placas, generalmente deben ser calentadas para retirar el agua y así tener una buena separación.

La magnitud del calor depende de la separación que se requiere, para compuestos hidrofilicos o polares, las placas de óxido de aluminio y de gel de sílice con adhesivo requieren ser secadas en horno durante aproximadamente 30 minutos a 100°C.

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Cámaras de elucion para el desarrollo de la cromatografía en capa fina

Una cámara de elución en un recipiente preferentemente de vidrio transparente para observar la separación de componentes en la cromatografía en capa fina, en el cual se lleva a cabo el siguiente desarrollo:

El desarrollo se lleva a cabo en frascos por el método ascendente, en el interior del frasco debe colocarse un papel filtro empapado de disolventes que cubra las paredes interiores del mismo para conseguir que la atmosfera este saturada de vapor del disolvente. El fondo del frasco se cubre de disolvente hasta una altura de o.5 a 1 cm y después de un periodo de tiempo apropiado en el que se consiga el equilibrio se introduce la placa. Durante el desarrollo no puede moverse el frasco.

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Adsorbentes[pic 8][pic 9]

La sustancia adsorbida se llama adsorbenta y la fase sobre cuya superficie se acumula el adsorbato se llama adsorbente. En un sólido las interfaces son fijas, cuando es liquido la interface es móvil y la superficie de contacto puede varar debido a la tencion superficial. Los adsorbentes se dividen en dos grupos principales:

Los polares (alumina, sílice, carbonato cálcico) y los no polares (carbón activado).

Eluyentes

El poder de la adsorción de pende de la naturaleza del disolvente, como la del adsorbente. Por lo general para llevar la mezcla de los compuestos a columna se utiliza un disolvente relativamente poco polar para el desarrollo de la cromatografía y para la elución de los productos adsorbidos un disolvente más polar.

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Objetivo

- Conocer mediante la cromatografía de capa fina en que disolventes polares o no polares se separan los componentes de la muestra de betabel.

- Una vez conocidos los disolventes en que corre la muestra de betabel, utilizarlos para separar los componentes de la muestra, ahora en cromatografía en columna.

Hipótesis

Si los disolventes polares tienden a separar más fácilmente los componentes de las muestras, entonces gracias a la serie elutropica será posible identificar con que disolventes se separaran los componentes del betabel.

Material

- Soporte universal

- Pinza de doble presión

- 5 vasos de precipitado de 50 ml

- Varilla de vidrio

- Embudo de tallo corto

- Porta objetos

- Capilares

- Micro pipetas Pasteur

- Mortero

- Pinzas

- Tubos de ensayo

- Papel filtro

- Lámpara de rayos UV

- Frascos de guerber (grandes)

- Bureta de 10 ml

Reactivos

Cloroformo

Metanol

Formamida

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[pic 17][pic 18]

- Isoctano

- Ciclohexano

- Hepteno

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