Detección y aislamiento de un Bacillus Molecular Biology and Biotechnology Core Group, Facultad de Ciencia y Tecnología de Recursos,

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A partir de estas reacciones morfológicas y bioquímicas, el aislamiento fue tentativamente identificado como B. amyloliquefaciens (Tabla 1). Una identificación adicional, usando el kit API 50 CHB, también reveló que el aislado era B amyloliquefaciens. Otro sistema de identificación comercial, el sistema automatizado Biolog, que se basa en la caracterización bioquímica de 95 compuestos diferentes, también confirmó que el aislamiento era B amyloliquefaciens.

Tabla 1. Características bioquímicas y de crecimiento del aislado bacteriano (UMAS 1002).

Características / pruebas bioquímicas

Observación

Gram reacciones

Gram positivas

Endospore formación / espora ubicación

Endosporas centrales ovales

Motilidad

positivo

Catalase

positivo

Hidrólisis del almidón

positivo

Lecitinasa

negativo

Crecimiento a 50 ° C

positivo

Crecimiento en NaCl al 7%

positivo

Reacciones de Voges-Proskauer (V-P)

positivo

Utilización de citrato

positivo

Reducción de NO3 en NO2

positivo

Cuando el aislamiento fue cultivado en residuos de médano de sagú, hidrolizó el sustrato de médula en azúcares reductores. Después de 24 h, se detectaron azúcares reductores en el sobrenadante a una cantidad estimada de 1,03 mg / ml (Tabla 2). La detección de los componentes de los azúcares reductores por HPLC reveló la presencia de dos azúcares, maltosa y glucosa. El aislado también produjo las enzimas celulasa y amilasa, en base a las actividades detectadas en el filtrado del cultivo. Las actividades de celulasa y amilasa medidas en el filtrado después de 24 h fueron de 0,63 y 0,38 I.U., respectivamente (Tabla 2). Para determinar el patrón de producción de azúcares reductores y las enzimas celulasa y amilasa por el aislamiento sobre residuos de médano de sagú, el crecimiento del aislado en medio de desecho de médula de sagú se extendió hasta 72 h. Los azúcares reductores y la actividad enzimática en el filtrado bruto se ensayaron a un intervalo de 6 h durante las primeras 24 h, seguido por cada 24 h hasta 72 h de incubación. La Tabla 2 demuestra el nivel de azúcares reductores y las actividades celulolíticas y amilolíticas durante un periodo de 72 h, medido por la capacidad del filtrado del cultivo para degradar CMC y almidón, respectivamente. El contenido máximo de azúcares reductores fue de 1,03 mg / ml a las 24 h, lo que representa el nivel más alto de producción. Después de 24 h, los azúcares reductores disminuyeron y el nivel más bajo (0,07 mg / ml) se detectó a las 72 h.

Tabla 2. Producción de azúcares reductores y las actividades celulolíticas y amilolíticas de B. amyloliquefaciens (UMAS 1002) en medio líquido.

Tiempo (h)

Reduciendo azúcares

[pic 1]

Actividad celulolítica (CMCasa)[pic 2]

Actividad amilolítica[pic 3]

[pic 4]

La actividad celulolítica continuó aumentando y alcanzó el máximo (0,63 I.U./ml) a las 24 h, aunque se observó una ligera disminución (0,45 mg / ml) a las 18 h. Después de 24 h, las actividades celulolíticas disminuyeron, ya las 72 h permaneció muy poca actividad (0,17 I.U./ml). Se encontró que el patrón de actividades celulolíticas seguía la tendencia a reducir la producción de azúcar. Por el contrario, la actividad amilolítica era muy baja (0,38 I.U./ml) a las 24 h, pero aumentó bruscamente a las 48 h y continuó hasta 72 h (2,30 I.U./ml). Sobre la base de la producción más alta de azúcares reductores detectada en 24, muestra que una cantidad alta puede ser alcanzada en sólo 24 h. Esto sugiere que se puede lograr una alta producción de azúcares reductores en 24 h, eliminando así la necesidad de una incubación prolongada. De este estudio está claro que el aislamiento indígena identificado como B. amyloliquefaciens tiene la habilidad de hidrolizar residuos de médula de sagú en azúcares reductores. Sobre la base del valor máximo de 1,03 mg / ml de producción de azúcares reductores, se calcula que aproximadamente

Se pueden obtener 315 mg de azúcares reductores a partir de cada gramo de desperdicio de médano de sagú utilizado. Sobre esta base, si se utiliza 1 tonelada de residuos de médula de sagú en una fermentación discontinua utilizando el aislado bacteriano UMAS 1002, se pueden obtener aproximadamente 0,315 toneladas de azúcares reductores después de 24 h. En el estado de Sarawak, se ha estimado que cada fábrica de sagú produce aproximadamente 7 toneladas de residuos de médula de sagú cada día (Bujang et al., 1996). Esto es una cantidad enorme, y si el aislado bacteriano UMAS 1002 puede ser usado para convertir este residuo en azúcares reductores, como se muestra aquí, se habrá hecho una contribución considerable a su utilización. Los azúcares reductores producidos pueden usarse fácilmente para alimento humano y animal o como materia prima en la producción de etanol, alcohol combustible y otras industrias relacionadas que están bien establecidas (Govindasamy et al., 1992). B. amyloliquefaciens se ha informado ampliamente que produce enzimas amilasa (Abante et al., 1999, Priest, 1977, Yoo et al., 1988), pero hasta ahora no se ha informado que también produce enzima celulasa, aunque otras especies de Bacillus Se ha demostrado ampliamente que produce varios componentes de las enzimas celulasas (Pajni et al., 1989). Nuestro hallazgo aquí ha demostrado la capacidad de B. amyloliquefaciens para producir enzimas amilolíticas y celulolíticas. La existencia de estas enzimas en un organismo sería una ventaja definitiva