Estudiar la estructura de la biomasa (carbohidratos de reserva, compuestos lignocelulósicos y ácidos grasos), organización macroscópica y microscópica (órganos, tejidos y tipos de células) y la relación con sus propiedades fisicoquímicas.

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Tabla 3. Relación colorante-componente en fibras vegetales.

Constituyente

Reactivo

Coloración

Celulosa

Azul de toluidina

Azul o violeta, algunas hemicelulosas se tiñen de azul, lignina y suberina y cutina de amarillo o naranjado.

Cloruro de zinc iodado, ácificado (ZnCL2-I)

Se usa para detectar las paredes celulósicas dando una coloración azul

Yodo y ácido sulfúrico al 80%

Da una coloración azul con los tejidos celulósicos.

lignina

Floroglucinol acificado

Da un color rojo con la lignina y todos los tejidos lignificados.

Lípidos (Cutícula)

Sudan III

Da un color anaranjado con aceites volátiles y fijos, grasas y tejidos suberizados.

Material Péptico

Rojo de rutenio

Da un color rojo con muchas gomas y mucílagos.

Taninos

Cloruro férrico

Da un color y/o precipitado azul oscuro en los taninos derivados del pirogalol y verde oscuro con los taninos derivados de catecol.

Almidón

Solución de lugol

Da un color azul con los granos de almidón y un color amarillo con los granos de aleurona.

- MUESTRA

Control de Muestras.

Fecha

Origen de la muestra (Residuo, Planta)

Sección (Hoja, Tallo, Raíz, Fruto)

Lugar de recolección.

Análisis realizar.

- EQUIPOS Y MATERIALES

- Microscopio compuesto

- Estereoscopio

- Balanza

- Portaobjetos

- Cubreobjetos

- Pipeta graduada de 10mL

- Baker de 250 mL

- Caja de Petri

- 10 Goteros

- 10 Botellas Tipo gotero color ámbar

- Equipo de disección de botánica.

- Navajas con hojas de acero inoxidable.

- Pinzas de punta fina

- Papel para Filtrar

- REACTIVOS

- Solución de cloruro de zinc yodado: disolver 20g de cloruro de zinc (ZnCl2) y 6.5 g de yoduro de potasio (IK) en 10.5 mL de agua. Envasar y mantener el recipiente en la oscuridad por varios días.

- Yodo (0.1 mol/L): Pesar 1,27g y disolver en agua destilada hasta completar 50 mL.

- H2SO4 (60%): Medir 31,6 mL de H2SO4 al 95% en 20 mL de agua destilada, pasar a un balón aforado de 50 mL y completar su volumen.

- Solución alcohólica de floroglucina (1% de etanol del 90%). Disolver 1 g de floroglucinol en 100 mL de etanol en 90 %. Filtrar y almacenar en una botella ámbar.

- HCL concentrado al 37%.

- Sudan III: Medir 50ml de alcohol etílico al 70%, pasar a un vaso precipitado, agregar 0,5 g de Sudan III. Caliente la mezcla en baño de María a 50°C sin dejar de agitar, hasta que disuelva. Dejar enfriar la solución, filtrar con papel filtro. Envasar en un frasco hermético y rotular el frasco.

- Alcohol al 70%.

- Cloruro férrico al 10 %. Pesar 10 g de FeCl3 en 100 mL de H2O y añadir 5 a 10 mL de HCL concentrado.

- Lugol (yodo-yoduro potásico 2%): disolver 2 g de yoduro potasio (KI) en un poco de agua destilada y agregar 0,2 g de yodo (I2), disolver y completar a 100mL con agua destilada.

- Rojo de rutenio: Tomar un poco del reactivo con la punta de la espátula y disolver en 10 mL de agua destilada. Mantener en frasco ámbar y en refrigeración.

- METODOLOGÍA

El profesor pondrá a disposición del estudiante una serie de placas previamente preparadas, en las cuales debe identificar con la ayuda del microscopio, las estructuras y constituyentes en los cortes observados. Señale las partes de la célula implicada y los reactivos respectivos.

Detección de celulosa: colocar la muestra de ____________________ sobre el porta objeto, verter 1 o dos gotas de solución de cloruro de zinc yodado. Dejar reposar por 2 minutos y agregar 1 gota de yodo (0.1 mol/L), dejar reposar por 1 minuto, remover el exceso de reactivo con una tira de papel filtro y agregar 1 gota de H2SO4 60%. Colocar el cubreobjeto y observar al microscopio.

Placa __.

Detección de lignina: Colocar el material vegetal (____________________) sobre la lámina y humedecerlo con una solución alcohólica de floroglucina, dejar secar a temperatura ambiente. Agregar una gota de HCL concentrado, poner el cubreobjetos y observar los vasos lignificados de colores desde el rosado hasta el color rojo carmín. Se pueden observar la presencia de fibras, parénquima.

Placa __.

Detección de Lípidos: colocar la muestra, _______________, sobre el portaobjetos, verter 2 o 3 gotas de Sudan III y dejar actuar 2 o 3 minutos. Escurrir el líquido y lavar con alcohol 70%. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio. Los lípidos aparecen como gotas de color rojo.

Placa __.

Detección de Taninos: Colocar la muestra, ________________,sobre un portaobjetos y verter