Existen dos principales grupos histológicos del cáncer de pulmón

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1. La definición de los valores umbrales para establecer el diagnóstico de carcinoma escamoso. Para este objetivo se utilizaron 27 muestras (12 adenocarcinomas y 15 escamosos) cuyo diagnóstico se realizó, siguiendo la última clasificación de la OMS, por dos patólogos independientes procedentes de la Universidad de New York o por un solo patólogo de la Universidad de Columbia. En este último caso, el diagnóstico se comparó con el diagnóstico que constaba en la historia clínica.

2. La validación del método diagnóstico siguiendo los valores de corte obtenidos en el paso previo. En este caso, los investigadores desconocían el subtipo histológico de las 79 muestras, estableciendo el diagnóstico diferencial siguiendo el sistema anteriormente explicado.

El objetivo de Bishop et al. (2010) fue establecer la sensibilidad y especificidad de la expresión de los miRNAs por qRT-PCR para el diagnóstico diferencial de NSCLC. Para ello, realizaron un estudio de pruebas diagnósticas de diseño caso-control (fase II) con 102 muestras tumorales (81 resecciones tumorales y 21 biopsias preoperatorias) procedentes del Hospital Johns Hopkins de Baltimore (USA), con diagnóstico histológico establecido de adenocarcinoma o carcinoma escamoso de pulmón. A estas muestras se les extrajo el RNA para la cuantificación de los miRNAs hsa-miR-205, hsa-miR-21 y U6 snRNA. Las mediciones se hicieron por triplicado para obtener la media de los Ct excluyendo las medidas outliers (cuando diferían más de un ciclo de la mediana). La puntuación final se obtuvo usando la fórmula Ct miR205– [(Ct miR21 + Ct miRU6)/2]. El método estándar utilizado para el diagnóstico con el que se realizaron las comparaciones consistió en la histología más los resultados de un panel inmuno-histoquímico compuesto por marcadores (factor de transcripción tiroideo1 (TTF-1), la napsina A y P63) cuya expresión es usada para clasificar los NSCLC.

Lebanony et al. (2009), en su estudio comparativo identificaron hsa-miR- 205 como el miRNA cuyos niveles de expresión eran los que más diferencias presentaban, estadísticamente hablando, entre los dos subgrupos de tumores, encontrándose sobre expresado en el subtipo escamoso (la mediana de la fluorescencia normalizada fue 36 veces mayor en este grupo respecto al adenocarcinoma). Este resultado se confirmó utilizando la técnica qRT-PCR, encontrándose una alta correlación con la anterior (coeficiente de correlación de Pearson=0,94; IC95%: 0,88-0,97).

Los valores umbral de acuerdo a los valores de expresión normalizados obtenidos por qRTPCR, se observó que el valor 2,5 separaba los NSCLC escamosos de los no escamosos. Muestras con valores inferiores a 2,5 se clasificaron como carcinomas escamosos. A continuación, se definieron los siguientes valores de corte para cada categoría:

- Igual o menor de 1: alta certeza de carcinoma escamoso.

- Entre 1 y 2,5: baja certeza de carcinoma escamoso.

- Entre 4 y 2,5: baja certeza de carcinoma no escamoso.

- Mayores de 4: alta certeza de carcinoma no escamoso. En el estudio de Bishop et al. (2010)15 se utilizó este valor umbral previamente establecido por Lebanony et al. (2009)16.