INSTRUMENTACION PARA CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS

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Bombas reciprocantes

Por lo regular, este tipo de bombas consiste en una pequeña camara en la que el solvente es impulsado por el movimiento de vaiven de un piston accionado mediante un motor (vease figura 28.5). Dos valvulas de globo unidireccionales, que se abren y cierran de manera alternada, controlan el flujo del solvente hacia dentro y hacia afuera de un cilindro. El solvente esta en contacto directo con el piston. Tambien se puede comunicar la presion al solvente mediante un diafragma flexible, el cual a su vez es bombeado hidraulicamente por un embolo de vaiven. Las bombas reciprocantes tienen la desventaja de producir un flujo pulsado que se tiene que amortiguar porque los pulsos se manifiestan como ruido en la linea base del cromatograma. Los instrumentos modernos de LC estan equipados con cabezas dobles para las bombas o levas elipticas para reducir al minimo dichos pulsos. Entre las ventajas de las bombas reciprocantes se pueden citar su pequeno volumen interno (35 a 400 μL), sus altas presiones de salida (hasta 10 000 psi), su facil adaptacion a la elucion con gradiente, su gran capacidad de solvente y sus flujos constantes, que son practicamente independientes de la contrapresion de la columna y de la viscosidad del solvente.

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Bombas de desplazamiento

Por lo general, las bombas de desplazamiento consisten en unas grandes camaras similares a las de una jeringa, equipadas con un embolo que se activa por medio de un mecanismo de tornillo accionado mediante un motor de etapas. Estas bombas tambien producen un flujo que tiende a ser independiente de la viscosidad y de la contrapresion. Ademas, el flujo que resulta esta libre de pulsos. Entre las desventajas estan una capacidad de solvente limitada (_250 mL) y muchas dificultades cuando este se tiene que cambiar.

Amortiguadores de pulsos

Muchos de los detectores utilizados en HPLC son sensibles a variaciones de flujo. Un método sencillo de amortiguación contiene un fuelle flexible o un gas compresible en la porción superior cerrada de un tubo en T para absorber parte de la energía de pulsación. Cuando la bomba se rellena esta energía se libera para ayudar a suavizar la pulsación de presión. Los amortiguadores electrónicos de pulsos proporcionan una carrera hacia delante corta y rápida del pistón, y enseguida la carrera rápida de recarga de la bomba. El pequeño impulso hacia delante amortigua el pulso de flujo llevando disolvente a la presión del sistema.

Control de flujo y sistemas de programación

Como una parte de sus sistemas de bombeo, muchos instrumentos comerciales estan equipados con dispositivos controlados por computadora que permiten medir la tasa de flujo mediante la determinacion de la caida de presion a traves de un constrictor colocado en la salida de la bomba. Cualquier diferencia entre la senal y un valor preestablecido se utiliza para aumentar o disminuir la velocidad del motor de la bomba. Asimismo, la mayor parte de los instrumentos puede variar la composicion del solvente sea de manera continua o en forma escalonada. Por ejemplo, el instrumento que se ilustra en la figura 28.3 contiene una valvula de alimentacion que permite mezclar hasta cuatro solventes en una forma previamente programada y que varie continuamente.

Sistemas de inyección de muestra

A menudo, el factor limitante en la precisión de las medidas en cromatografía de líquidos es la reproducibilidad con que se puede introducir la muestra en la columna. El problema se agrava por el ensanchamiento de banda que acompaña a la sobrecarga de las columnas. Por ello, los volúmenes que se emplean han de ser muy pequeños, de unas pocas décimas de microlitro a tal vez 500 µL. Además, se ha de poder introducir la muestra sin despresurizar el sistema. En cromatografía de líquidos el método más ampliamente utilizado para la introducción de la muestra utiliza rizo de muestra, como el que se muestra en la Figura 4.4. Estos dispositivos están normalmente integrados en el equipo cromatográfico y hay rizos intercambiables que permiten la elección de tamaños de muestra desde 5 a 500 µL. Con rizos de este tipo se puede introducir la muestra a presiones de hasta 500 kg/cm2 con una precisión relativa de unas décimas por ciento. También existen válvulas de inyección de micromuestras, con bucles con volúmenes de 0,5 a 5 µL.[pic 3]