Inhibicion y sustrato

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S + E ES P[pic 1][pic 2][pic 3][pic 4]

En esta ocasión fue utilizada la enzima inversata con su sustrato sacarosa, la cual cataliza la hidrolisis de la sacarosa para convertirla es sus monosacáridos (Fructosa y glucosa).

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Invertasa[pic 6][pic 7]

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pH 4.7

T 25°C[pic 9]

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Como pudimos observar en la gráfica (Anexo), la velocidad de la reacción enzimática fue incrementando a medida que se le suministraba sustrato, al inicio pudo verse un incremento mayor esto se debe a que la enzima puede trabajar bien a bajas concentraciones de sustrato, ya que aumenta la posibilidad de formar los complejos E-S que se requieran, pero a medida que va aumentando la cantidad de sustrato, ya no habrá enzimas suficientes y empezara a ser constante su velocidad, hasta llegar a su V max, que se dice que la enzima esta saturada por su sustrato.

Posteriormente se agrega 3-5DNS para detener la reacción enzimática, ya que la enzima se desnaturaliza, también ayuda a que tenga un pH alcalino y así que la fructosa se convierta en glucosa mediante el equilibrio ceto-enolico.

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Lo que sucede aquí es una reacción de óxido-reducción, en donde la glucosa se oxida y el 3,5-DNS se reduce, es por eso que a la glucosa se le llama azúcar reductor, ya que tiene la capacidad de reducir a otro compuesto. Posteriormente se lee la absorbancia que, es la concentración de color que tiene cada tubo.

En la segunda parte de la practica fue inhibición enzimática, un inhibidor es aquel que tiene la capacidad de disminuir la actividad de las enzimas, esto se debe a que estas pueden unirse a la enzima, impidiendo que el sustrato entre, la inhibición puede ser reversible o irreversible.

En nuestro caso se observó que el inhibidor ocupado es reversible, porque a pesar de que se agregó el inhibidor, hubo actividad enzimática, ya que hubo cambio de color, si fuera irreversible, no se hubiera notado el cambio y los tubos habrían sido del color del testigo.

Como observamos en la gráfica (Anexo 2), nuestros resultados arrojaron que es un inhibidor reversible acompetitivo, por lo tanto cambia tanto Km como Vmax. Km es la concentración de sustrato, a la que la velocidad de reacción es la mitad de la Vmax. Vmas es cuanto la concentración del sustrato deja ser proporcional a la velocidad de la reacción enzimática.

Como vimos en los valores de Km, Km con inhibidor baja, ya que podemos concluir que la enzima tiene gran afinidad por su sustrato, es por ello que baja, si fuera lo contrario km hubiera subido.

Conclusiones:

Se puedo analizar que el sustrato tiene efecto sobre la velocidad de reacción enzimática, y se pudo observar en la gráfica ese efecto.

Igualmente se pudo demostrar ante la teoría, que al añadir inhibidor, la velocidad de la reacción disminuye.

Por último se encontró que la anilina es un inhibidor reversible acompetitivo.