La detección y la secuenciación del virus Zika del líquido amniótico de los fetos con microcefalia en Brasil: un estudio de caso

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Los primeros casos autóctonos del virus Zika en Brasil fueron confirmados en mayo de 2015. 16 la circulación del virus A partir de entonces, a partir del 6 Ene de 2015, 21 estados han confirmado, con una mayor prevalencia en la región Nordeste. 17 Los informes de incidencia microcefalia en Brasil geográficamente solaparse con informes de virus Zika; la mayoría de las madres cuyos bebés fueron diagnosticados con microcefalia quejado durante sus embarazos de manifestaciones clínicas, como la fiebre baja, dolor de cabeza y erupciones cutáneas, que podrían haber sido síntomas de la infección por el virus Zika o infección con cualquier otra especie de arbovirus que es frecuente en la región.

A la vista de este potencial asociación entre la infección por el virus Zika y el creciente número de casos de microcefalia, el Ministerio de Salud de Brasil y la OMS han recomendado que las mujeres embarazadas deben tomar precauciones para evitar el contacto con todos los vectores potenciales, ya que ningún tratamiento antiviral específico para Zika existe infección por el virus. 1

Pequeños fragmentos del genoma de la cepa del virus Zika que circula en Brasil se han secuenciado y análisis filogenético ha indicado que el virus es similar a la que circulaba en la Polinesia Francesa en 2013. 16 y 17 Sin embargo, evidencia que vincula a la alta incidencia de la microcefalia a la presencia del virus Zika es escasa. En enero de 2016, nuestro grupo reportó evidencia la imagen de ultrasonido de dos casos de microcefalia fetal en las mujeres que se habían quejado de síntomas del virus Zika-como durante el embarazo, y nos informó de los resultados de la PCR preliminares breves, lo que confirma la presencia del virus Zika en el líquido amniótico. 18 en este estudio de caso, que se expanden en estos hallazgos se informó anteriormente, y describir la forma en que usamos la transcripción inversa cuantitativa PCR (RT-qPCR) y metagenómica viral para detectar y secuenciar el genoma del virus Zika en las muestras de líquido amniótico de estas dos mujeres embarazadas con fetos microcefálicos.

métodos

Historias de casos

El primer caso en nuestro estudio fue de una mujer de 27 años de edad en su primer embarazo, a partir de un centro urbano en el estado de Paraíba, en la región Nordeste de Brasil (paciente 1). Su atención prenatal fue sin incidentes hasta principios de septiembre de 2015, cuando, a las 18 semanas de gestación, la mujer desarrolló una erupción cutánea con picor de las manos y la espalda. Sobre la base de su estado clínico, se le diagnosticó a una unidad de servicio de emergencia con la reacción alérgica, y se le prescribió hidrocortisona intravenosa. Al día siguiente, sus síntomas empeoraron ya que desarrolló fiebre y mialgias. Tenía Ultrasonido normal a las 16 semanas. El paciente no había viajado fuera del estado de Paraíba, durante los últimos años, y que no había tenido contacto con alguna de las personas enfermas. Ella no tenía inmunodeficiencia o enfermedades autoinmunes. A las 21 semanas de gestación, una ecografía más indicado un diagnóstico microcefalia fetal con ventrículomegalia moderado y agenesia parcial del vermis cerebeloso. Una tercera ecografía realizada a las 27 semanas confirmó el diagnóstico microcefalia con dilatación de los ventrículos relevante, la asimetría de los hemisferios y el cerebelo hipoplásico con total ausencia de vermis cerebeloso. El paciente estaba sano y estable durante los procedimientos de ultrasonido y la amniocentesis. Los resultados de todos los exámenes de laboratorio no mostraron diabetes y trastornos de presión sanguínea relacionada. Además, el paciente no informó de tomar cualquier medicamento (aparte de la hidrocortisona), el uso de drogas, el consumo de alcohol o fumar durante el embarazo. 1 paciente todavía está siendo supervisada por los médicos en nuestro grupo. A las 40 semanas de gestación el feto presenta microcefalia con áreas de calcificación y circunferencia de la cabeza de 29 cm evaluados mediante ecografía antes del nacimiento. El bebé nació a las 40 semanas de gestación y tenía una circunferencia de la cabeza real de 30 cm.

El segundo caso en nuestro estudio fue de una mujer de 35 años de edad en su primer embarazo, también del estado de Paraíba (paciente 2). El paciente, sin antecedentes personales de interés, buscó atención cuando desarrolló síntomas similares a la enfermedad de virus Zika suave a las 10 semanas de gestación. Se le prescribió un tratamiento sintomático. Una ecografía morfológica a las 22 semanas de gestación reveló hipoplasia leve del vermis cerebeloso. La circunferencia de la cabeza del feto en la semana 22 del embarazo estaba por debajo del percentil 10. Una segunda ecografía realizada a las 25 semanas de gestación reveló hipoplasia más grave del vermis cerebeloso, la ampliación de la fosa posterior, y microcefalia, produciendo una circunferencia de la cabeza debajo del tercer percentil. El parénquima cerebral fue normal. El paciente estaba sano y estable durante los procedimientos de ultrasonido y la amniocentesis. Todos los exámenes de laboratorio no mostraron evidencia de diabetes o trastornos relacionados con la presión sanguínea. Además, no se presentó de tomar cualquier medicamento, el uso de drogas, el consumo de alcohol o fumar durante el embarazo. El paciente 2 todavía está siendo supervisada por los médicos en nuestro grupo. Ella entregó el 3 feb, 2016, y el recién nacido presenta ventrículomegalia severa, microftalmia, cataratas, y artrogriposis severa en las piernas y los brazos.

Coleccion de muestra

Siguiendo las recomendaciones de salud pública de Brasil, la amniocentesis se realiza en la semana gestacional 28 tanto en mujeres como para investigar la causa de la microcefalia. guiada por ultrasonido amniocentesis transabdominal estaba hecho y aproximadamente 5 ml de líquido amniótico se aspiró y se almacenó inmediatamente a -80 ° C.

metagenómica y análisis de secuencias virales

A 0 · 5 ml de muestra del líquido amniótico de cada paciente se filtró a través 0 · 45 micras filtros para eliminar las células huésped residuales. Las muestras se centrifugaron a 21 130 x g y 15 000 rpm (rotor FA-45-24-11, Eppendorf, Hamburgo, Alemania) durante 90 min a 4 ° C para concentrar las partículas de virus. Partículas de virus sedimentadas fueron tratadas con desoxirribonucleasa y ribonucleasa A a 37 ° C durante 90 min de acuerdo a protocolos previamente comunicados. 19 se aisló ARN usando el QIAamp MinElute Virus Kit de Spin (Qiagen, Hilden, Alemania), omitiendo el ARN portador.