Laboratorios de Biología Celular y Microbiología.

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Ya en la preparación de la muestra problema para posteriormente medir la absorbancia se tomaron 3 tubos de ensayo a los cuales a los tres se le adicionaron 0.5 ml de esta, al tubo (1) se le adicionaron 3 ml, al tubo (2) 5 ml y al tubo (3) 10 ml de agua destilada.

Una vez preparados todos los patrones se dejaron reposar durante 7 minutos una vez pasado este tiempo el contenido de cada tubo se traspasó a las celdas correspondientes para medir la absorbancia de cada patrón.

Resultados y discusiones

Proceso cualitativo para la identificación de proteínas:

[pic 2][pic 3]

Imagen 1. Prueba de Biuret

[pic 4] [pic 5]

Agua, albumina, leche entera y deslactosada Soluciones + CuSO4

Imagen 3. muestra de proteinas

[pic 6]

Soluciones+ CuSO4 + NaOH

En este proceso cualitativo se utilizó CuSO4 y NaOH. El Hidróxido de sodio no participa en la reacción, pero proporciona el medio Alcalino necesario para determina si la muestra de estudio resulta positiva o negativa; una disolución de sulfato de cobre en medio alcalino reconoce el enlace peptídico de las proteínas mediante la formación de un complejo por lo tanto la reacción de sulfato de cobre, el reactivo de color azul (evidenciado en la imagen (2) y (3), respectivamente) cambia a violeta en presencia de proteínas en medio alcalino[1]; como se puede observar en las muestras la albúmina como las muestras problemas al agregar los reactivos de CuSO4 y NaOH hay cambio de color violenta (imagen (1) y (2)) lo cual significa la presencia de proteínas.

Después de haber trascurrido un tiempo se pudo observar que la leche se empezó a cortar hubo presencia de turbidez lo cual significa que la leche empezó a desnaturalizarse debido a que se agregó acido (CuSO4) y eso afecta su PH.

Proceso cualitativo del huevo con un ácido y una base

El huevo presenta cadenas de proteínas denominada globulares su estructura es de forma esférica. Al mezclar la clara de huevo con el hidróxido de sodio las cadenas de la proteína forman un precipitado y una suspensión, esto se genera debido a la poca solubilidad que se encuentra en las proteínas ya que presenta una estructura primaria. La clara de huevo con el ácido sulfúrico genera un cambio de estructura y el desarrollo de nuevos enlaces que unen otras cadenas de proteínas, formando inconsistencia apariencia de espuma y cambio de color amarrillo. El cambio físico en los dos factores se debe a la desnaturalización ocasionando cambios que pueden ser irreversibles.

Prueba cuantitativa, Método de Bradford

Imagen 4. Tren de dilución.

[pic 7]

Sabiendo que las proteínas tienen propiedades intrínsecas, como poder absorber la luz en el UV o de unirse y formar ciertos colorantes. Este método utiliza la última propiedad para determinar la cantidad de proteínas, teniendo como ventaja que es muy sensible, simple y rápidas; las interferencias son mínimas ya que solo reacciona con detergentes o algunas soluciones básicas.

Al realizar el respectivo proceso por medio de unas muestras patrón para así encontrar la absorbancia de una muestra problema. Se evidencia en la tabla 1, la absorbancia de cada muestra a determinada concentración, para así poder encontrar la gráfica 1.

Tabla 1. Concentración y Absorbancia

Concentración (µg/ml)

Absorbancia

595 nm

0

0,013

1,25

0,033

2,5

0,091

5

0,223

10

0,340

20

0,503

En la gráfica 1 se encontró la ecuación de la recta en la cual nos dio un coeficiente de correlación de 0.9493. Mostrando que el resultado no será el más preciso pero su confiabilidad es aceptable ya que se encuentra cerca de 1.

Gráfica 1. Absorbancia Vs Concentración.

[pic 8]

En la gráfica vemos que a 5 y 10 ug/ ml la absorbancia fue elevada respecto a las demás concentraciones mostrando una mínima elevación en la curva. La ecuación 1 fue la ecuación dada por la curva; la cual al despejar x se halló la concentración de la muestra problema en distintas disoluciones las cuales se evidencian en la tabla 2.

En la tabla 2 hacemos una comparación de la concentración, en sus diferentes disoluciones. En la muestra 1 se disolvió 0,5 ml de muestra problema en 3 ml, en la segunda en 5 ml y la última 10 ml. Se evidencia que el de 10 ml a pesar de que su disolución es mayor es el que nos da una concentración más alta de la muestra, a comparación de los otros que nos da una concentración más baja. Esto se puede dar porque como se encuentra más diluido puede hacer más evidente la absorción de las proteínas

Tabla 2. Concentraciones de la muestra problema.

Muestra

Absorbancia

(595nm)

Concentración

(µg/ml)

Concentración Real

(µg/ml)

Concentración

(g/L)

1

0,296

10,275

71,922

0,072

2

0,238

7,955