Microbiologia aplicada. Virus en plantas

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La lectura de concentración del virus se realizó en dos espectrofometros, el primero en Ultramark y el segundo en un BIO-RAD modelo 35550-UV. (7)

Identificación viral en tomate:

Para la identificación de virus en el tomate (Lycopersicum sculentum L.) en Guatemala se tomó en cuenta las enfermedades relacionadas con geminivirus ocasionadas por el vector mosca blanca (Bemisia tabaco) y otros virus no transmitidos por B. tabaci; en la fase de campo se recolecto muestras foliares en plantaciones de tomate que mostraban algunos síntomas de la enfermedad del tomate, esta recolección se realizó del 6 al 9 de abril (1992), conservándolas en una hielera hasta su análisis.

El análisis para virus no transmitidos por B. tabaci Genn fue realizado por medio de la prueba serológica ELISA doble sándwich de anticuerpos (DAS), en los laboratorios de la Universidad del Valle de Guatemala el 10 de abril. Para el análisis de las pruebas para Geminivirus que si son transmitidos por B. tabaci Genn se separaron 21 muestras de 51 y se realizaron las pruebas entre el 22 de agosto – 1 de septiembre. (8)

Identificación viral en melón:

Según datos de la delegación provincial de la consejería de agricultura y pesca de alimentaria, la especie hortícola del melón (Cucumis melo L.) es ampliamente cultivada en la zona costera mediterránea, se analizara muestras para la identificación del virus de las manchas necróticas del melón (MNSV), debido a que se encuentra relacionado a la muerte súbita del melón; causando una grave enfermedad en cultivos de melón en varios países.

Se realizaron inoculaciones por transmisión mecánica sobre especies indicadoras, utilizando distintas especies pertenecientes a las familias Cucurbitacae, Chenopodiaceae, Leguminoseae, Amaranthaceae y Solanaceae. Para obtener las condiciones del uso del vegetal y del antisuero, se utilizó como antígeno extracto de las zonas de hipotico y hojas de plantas del melón. El análisis de las muestras se efectuó mediante el D.I.A. (Dot Inmunobinding Assay) según el procedimiento descrito para el virus TSWV.

Los análisis de plantas en invernadero usando como fuente viral: tallos, peciolo, pedúnculos y hojas con y sin síntomas de enfermedad vírica; en total se analizaron 250 plantas provenientes de 18 invernaderos diferentes mediante pruebas serológicas para la identificación del fitopatogeno. (9)

Identificación viral en yemas de cerezo.

Identificación del Virus Anillado Necrótico de los Prunus (PSVR); este virus puede causar varias enfermedades, debido a que presenta varios strains, es un virus transmitido por semilla, diseminado por medio del polen y por propagación vegetativa de personas infectadas lo cual ocasiona pérdidas de yemas y puas de mala calidad y reduce el crecimiento y rendimiento de los árboles. Para su identificación se recolectaron en los meses entre julio y agosto 46 yemas de árboles de cerezo como muestra, provenientes de 7 huertos.

Las muestras fueron secadas a temperatura ambiente, y el paso siguiente fue su análisis mediante la prueba serológica de inmunoadsorcion ligado a enzimas (ELISA). Las herramientas empleadas como el antisuero y el conjugado fueron adquiridos mediante el laboratorio ELISA, de la Universidad de Washington; la enzima del conjugado fosfatasa alcalina tipo IV, del Laboratorio Sigma.

Para considerar que la muestra como positiva a NRSV, el criterio fue que el valor de la lectura a base de espectrofotómetro DO405 nm fue, como mínimo, dos veces el valor del tejido sano. (1)

Identificación viral en pimiento:

El pimiento (Capsicum anumm L.) representa el 60% de la producción nacional en Coquimbo, Chile; durante 1997 – 2000 se vio afectada por síntomas de enfermedad vírica como: deformaciones, manchado, y disminución del tamaño de los frutos.

Para la identificación de virus se recolectaron muestras de hojas, brotes y frutos de plantas con síntomas virales, las muestras fueron conservadas en refrigeración en bolsas de plástico hasta su análisis en el laboratorio de fitopatología del Centro Regional de Investigación la Platina (INIA), Santiago; el método de análisis fue mediante ensayo serológico DAS – ELISA. Las muestras se sometieron a la reacción con los siguientes antisueros de virus reportados en chile y transmitidos por vectores: virus del mosaico de la alfalfa (AMV), virus del mosaico del pepino (CMV), virus Y de la papa (PVY), virus del tomate o marchitez manchada del tomate (TSWV), impatients necrotic spot virus (INSV), virus del mosaico del tabaco (TMV), y virus del mosaico del tomate (ToMV). (10)

Resultados.

Se analizaron 42 muestras de follaje de papa, del estado de Guanajuato donde se lograron identificar los siguientes virus con porcentaje de frecuencia: PVS (78.6%), PVA (73.8%), PVM (64.3%), PVY (42.9%), PVX (35.7%) y PLRV (23.8%). (5)

Los resultados de las 42 plantas con injertos de camote que fueron recolectados; todas presentaron sintomatología vírica. Las pruebas de membrana inmuno-ligada, RT- RCP e hibridación molecular infirieron que las infecciones más frecuentes fueron por SPFMV, seguidas por las SPFMV y el SPLCV; por otro lado el virus CMV no se encontró en ninguna muestra. (6)

Después del análisis respectivo se reportó los siguientes agentes causales de acuerdo al orden de frecuencia, presentes en todas las muestras obtenidas: los dos potyvirus OYDV con 63 % de frecuencia y LYSV con un 60.5 %, el virus GarCLV con 32.3 %, y SLV con un 21.0%. En las muestras se presentaron combinaciones de virus: OYD y LYSV los de mayor frecuencia, GarCLV y SLV, OYDV y SLV, OYDV y GarCLV, LYSV y SLV, LYSV y GarCLV. (7)

Los resultados del análisis de virus en el tomate se dividieron en dos:

- Virus no transmitidos por moscas blancas: se detectaron en total 6 diferentes virus: TMV, CMV, TEV, PVY, PVX, y TSWV.

- Virus trasmitidos por moscas blancas: de acuerdo por porcentaje de frecuencia los virus CMV y TMV con un porcentaje de 19.60%, PVY con 15.69 %, TbEV con 13.72%, PVX con 9.80 %, TSMV 1.96%. (8)

En México con el paso de los años se han identificado varios agentes etiológicos causantes de enfermedades virales, entre los cuales están: virus chino del tomate (CdTV), virus del enanismo arbustivo del tomate (TBSV), virus huasteco del chile (PHV), virus del rizado amarillo del tomate (TYLCV), virus de la marchitez manchada del tomate (TSWV),