PRACTICA DE LABORATORIO Nº 1 CARACTERIZACIÓN FÍSICO-QUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS

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VI. DISCUSIÓN

RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS:

El resultado del tubo 1 el cual cambió de transparente a morado azulado indica y concuerda con la teoría que dice que las proteínas reaccionan con el CuSO4 en medio alcalino formando un color violeta, produciéndose asi la reacción de Biuret.

El resultado del tubo 2 concuerda con la teoría que dice que para detectar la presencia de una proteína se usa el (CH3COO)2Pb que al reaccionar con la asteína y astina forma un precipitado de PbS color negro, igual al resultado final del tubo 2.

El resultado final del tubo 3 y 4 concuerdan con la teoría, ya que el tubo 3 que presentaba caseína reaccionó con el ácido Ninhidrina poniéndose de color violeta oscuro mientras que en el tubo 4 no sucedió nada ya que no tenía proteína alguna.

PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS:

Los resultados obtenidos en los 4 tubos están de acuerdo a la teoría que dice que las proteínas se desnaturalizan ante agentes físico-químicos como el calor, pH fuertes básico o ácidos y detergentes.

Los 4 tubos, contenían proteína y al ser expuestos a estos agentes, todos presentarán precipitación.

- CONCLUSIONES

- Se comprobó la reacción de Biuret en la albúmina al obtener un resultado positivo de ésta por el cambio de color (violeta) en el tubo de precipitación.

- Se comprobó la desnaturalización de las proteínas al obtener precipitados en todos los tubos que contenían albúmina y fueron expuestos a calor, pH fuerte básico, ácido y detergentes.

- CUESTIONARIO

- Indicar las reacciones químicas que se producen en la formación del complejo Biuret- proteína de color violeta.

- La reacción debe su nombre al Biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción la presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm.

La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos.

Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret. Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre más solución de proteína precipitó una coloración violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reacción positiva. Precipitando a una coloración amarilla la reacción nos torna negativa al no haber presencia de proteínas.

Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas.

- ¿Qué otras moléculas pueden dar la reacción Biuret?

- El reactivo de Biuret puede reaccionar al detectar la presencia de cualquier proteína, péptido corto u otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de descomposición desconocida.

- Mencionar otros métodos que también permiten reconocer y/o determinar proteínas.

- Método de Lowry: Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra. Consiste en dos reacciones: Reacción de Biuret y reacción de Folin, este ultimo caracteriza los grupos –OH reductores de los aminoácidos tirosina y tríptofano, junto con los complejos Cu+2. Se utiliza principalmente en orina.

- Turbidimetría: Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas.

- Absorción del ultra violeta: S e mide la absorbencia a 270nm originada fundamentalmente por los anillos aromáticos de triptófano y tirosina.

- Método de unión a colorantes.

- ¿Cuáles son los niveles de organización de la estructura proteica y sus enlaces correspondientes?

- La estructura proteíca se clasifica en primera, secundaria, terciaria y cuaternaria. La estructura primaria es el orden lineal de aminoácidos. Están enlazados por enlaces peptídicos. La estructura secundaria se caracteriza por una organización repetitivadel esqueleto peptídico. Los mas comunes son hélice alfa y la hoja beta. La estructura terciaria se refiere a la estructura tridimensional completa de la proteínas. Esta es mantenida por diferentes tipos de interacciones covalentes y no covalentes como: el puente de hidrogeno y electrones electrostáticos, la estructura cuaternaria describe una proteína que tiene multiples cadenas polipeptidicas, las subunidades interaccionas entre si a través de interaccione no covalentes.

- ¿Qué se entiende como estructura nativa y desnaturalización de las proteínas?

- Una molécula tan grande como la de una proteína, puede tomar muchas configuraciones diferentes (estructuras tridimensionales). De todas las configuraciones posibles, solo una o unas cuantas tienen actividad biológica: estas son las configuraciones nativas.

Al desplegarse una proteína, es decir, la desorganización de su estructura terciaria, se llama desnaturalización.

- ¿Qué efectos físico-químicos provocan la desnaturalización de las proteínas?

- Las proteínas pueden ser desnaturalizadas por medio de color, pH extremos y sustancias químicas especificas como detergentes entre ellos el SDS, la úrea o el cloruro de guanidina.

- Mencionar agentes físico-químicos desnaturalizantes de las proteínas, y sus mecanismos de acción.

- Consiste en la pérdida de la estructura terciaria, por romperse los puentes que forman dicha estructura. Todas las proteínas desnaturalizadas tienen la misma conformación, muy abierta y con una interacción máxima con el disolvente, por lo que una proteína soluble en agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita.

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