PRÁCTICA BIOQUÍMICA.

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En la cromatografía observamos manchas amarillas de aminoácidos como la Fenilalanina, Valina, Alanina y el mismo reactivo DNFB, los cuales eluyeron hacia la fase móvil debido a su carácter no polar, en la Fig. 1 se observa como la sustancia problema en la cual marcamos al amino terminal presenta dos manchas, la primera posee un Rf de 0.41 , al compararlo con las otras sustancias, coincide relativamente con la mancha del DNFB, por lo que entendemos que es el excedente de reactivo agregado al a.a terminal, la segunda mancha de la sustancia problema recorrió una distancia de 25.5 cm con un Rf de 0.68, en comparación a la Val con un Rf de 0.67, ambos difieren por aproximadamente 1 unidad, con base en la literatura, el grupo α amino termina de la Hemoglobina es la Valina, entendemos entonces que se logró identificar correctamente mediante la técnica cromatografía dicho grupo.

Conclusión

Se pudo comprobar que cuando a una molécula de proteína en este caso la hemoglobina es tratada por una hidrólisis ácida, su cadena se romperá en aminoácidos, al marcarla con el reactivo DNFB, se logra identificar el grupo α amino terminal en este caso: la Valina.

Pregunta extra: ¿Por qué Sanger eligió el DNFB?

Tuvo varias razones, entre ellas destacan que es un grupo que nos muestra un color altamente llamativo: amarillo. Por otro lado, el enlace del DNFB y el grupo amino terminal resiste condiciones extremas que nos permiten romper los enlaces peptídicos.

Bibliografía

Voet, D, Voet, J, Pratt C.W, Fundamentos de bioquímica. La vida a nivel molecular, 2da edición, Editorial Panamericana, España, 2007. Pág. 109

ISBN: 978-950-06-2314-8

Frank Bradley Aumstrong, Thomas Peter Bennett, Bioquimica, Editorial reverte,s.a 1982, ISBN: 84-291-7008-1, pag: 89-96