Paso 1 de organismos transgénicos

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Por eso para poder lograr la renaturación, se somete a una solución de sacarosa al 45%, con una temperatura entre 66-68°C.

Finalmente ha sido posible, lentificando el proceso mediante incremento de la viscosidad del solvente, observar que la velocidad del proceso de renaturacion depende del peso molecular y que la cinética es de la forma: exp ( - KVT~ ), siendo K proporcional a 1/ M, Ambas dependencias son indicativas de un proceso intramolecular de cierre, inverso del de deshelicoidalización que tiene lugar durante la desnaturación.

Recuperado de: http://www.iaea.org/inis/collection/NCLCollectionStore/_Public/07/270/7270573.pdf

Estudiante

Norberto Tabares Ramírez

Curso

Organismos Transgénicos

- Considere el fragmento de ADN:

5´-AAGAATTGCGAATTCGACTTAAGGGCCGCGCCGAAGCTTTAAAGGTTATATTTCC-3’

Cuantos fragmentos resultaran del corte con las siguientes enzimas de restricción, indique el número de pares (pb) de base de cada fragmento

- EcoRI: (G↓ AATTC):

- HaeIII: (GG↓ CC):

- NotI: (GC↓ CCGG):

- Con las tres enzimas juntas

Para poder entender la mejor respuesta, es importante saber que las enzimas de restricción les permiten a los biólogos moleculares cortar las moléculas de ADN de diferentes organismos y recombinar las piezas moleculares para producir moléculas de ADN recombinantes. Los plásmidos son piezas circulares de ADN que se encuentran naturalmente en las bacterias. Mediante la tecnología del ADN recombinante y las enzimas de restricción, los plásmidos de ADN recombinante se pueden diseñar para que clonen genes o expresen proteínas codificadas por genes. El nombre de enzimas de restricción, se deriva de la capacidad de las enzimas de restringir el crecimiento de los virus en las células bacterianas. Las enzimas de restricción logran esto al romper un enlace en la cadena fosfato-azúcar del ADN viral; las enzimas cortan el ADN viral en pequeños fragmentos.

[pic 1]

Si las moléculas de ADN de origen diferente se digieren utilizando la misma enzima de restricción, las bases no apareadas de cada pieza deben poder unirse (o recocerse), dado que las bases no apareadas en los extremos cohesivos serán complementarias, A:T y G: C. Este es el único atributo de las enzimas de restricción que les permite a los ingenieros genéticos combinar fragmentos de ADN de diferentes organismos para producir moléculas de ADN recombinante.

[pic 2]

Figura 1. (a) molécula de ADN con sitios de restricción BamH I y Hind III (en negritas). Las flechas indican los sitios donde las enzimas cortarán la cadena fosfato-azúcar de la molécula de ADN. (b) La molécula de ADN inferior indica la ubicación de los “extremos cohesivos” (negritas).

Finalmente, analizando el mapa de restricción del plásmido pARA-R. BamH I y Hind III son enzimas de restricción específicas y cortarán consistentemente el ADN bicatenario cuando se encuentren con su respectiva secuencia de reconocimiento de base seis. Estas ubicaciones de corte se llaman sitios de restricción. La molécula de ADN consta de dos cadenas de componentes básicos de nucleótidos. Estos componentes básicos están orientados en dirección opuesta en cada cadena. Por lo tanto, se dice que las dos cadenas que constituyen la molécula de ADN son “antiparalelas”. Por convención, podemos decir que una cadena está orientada en dirección de 5’ (“5 primo”) a 3’ (“tres primo”), mientras que la otra cadena está orientada de 3’ a 5’. Un cuidadoso análisis de las secuencias de restricción BamH I y Hind III revelará que las secuencias de nucleótidos son palíndromos; es decir, dicen lo mismo en ambas cadenas cuando se leen en sentido 5’ 3’.

[pic 3]

Por lo tanto, cuando el Hind III se encuentra con esta secuencia de base seis, cortará la hélice de ADN entre las bases de adenina adyacentes. Esto deja cuatro bases no apareadas que forman un “extremo cohesivo”.

[pic 4]

Recuperado de: http://www.babec.org/files/pdf_maestro/Amgen-Bruce%20Wallace/SG5-spanish.pdf

Yesica Lorena RamirezFiracative.

- Considere la siguiente secuencia de un fragmento de ADN aislado de una bacteria: 5'CTGATAAGGGATTTAAATTATGTGTCAATCACGAATGCTAATCGCTTAACACTTC 3'

Asumiendo que esta secuencia corresponde a la secuencia de la hebra codificadora, ¿cuál sería la secuencia de aminoácidos del polipeptido producido cuando un ARN mensajero (ARNm) transcrito de este gen sea traducido?

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RTA:

[pic 5]

- Considere la secuencia 5’- 3’ de ADN

1 ACGTAGCTAG TAAAGTCTGT CCTTGATAGA AGCTTCGACT GACTAGTACT

51 GGACTATCAC CTTGAAGGAC CTGTGGACTT AGTCTGATCG TGACCGTAAG

Este fragmento de ADN fue colocado en una solución con la endonucleasa de restricción HindIII que reconoce la secuencia 5’-AAGCTT-3’ e hidroliza el ADN entre los dos residuos de ácido adenílico. Con relación a este enunciado, responda: ¿Cuantos pb presenta el fragmento de ADN y cuantos fragmentos de ADN resultaran de la digestión con HindIII?

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Diego Javier Santos Cadena

- Un científico analizó la secuencia de bases nitrogenadas del ADN de una bacteria y verificó que era formada por los codones AGA-CAA-AAA-CCG-AAT. Verificó también que la secuencia de aminoácidos en el polipeptido correspondiente era serina-valina-fenilalanina-glicina-leucina. Al analizar el mismo segmento de ADN de otra bacteria de la misma colonia, verificó que la secuencia de bases era AGA-CAA-AAG-CCG-AAT, sin embargo, no verificó cualquier alteración en la composición de aminoácidos de la cadena polipeptídica. ¿Cómo usted explica