¿Por qué se elegiría un eucarionte más que un procarionte para expresar una proteína recombinante?

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6.- ¿Cuál es la aplicación de los baculovirus en la tecnología del DNA recombinante?

R = Los baculovirus solamente se utilizan para introducir el gen de interés entre el promotor de polihedrina y las secuencias de terminación.

7.- ¿Qué ventajas y desventajas tiene introducir el gene de interés en el (los) cromosoma(s) del hospedero?

R = Algunas de las ventajas son: no es necesario un indicador de selección, no existen proteosomas que destruyan la proteína de interés, no importa si el organismo hospedero es capaz de exportar las proteínas, la estructura protéica se ordena de forma adecuada para asegurar su funcionalidad, etc.

Algunas desventajas de este proceso son: alto costo de experimentación, dificultades en la misma experimentación, es necesario el conocimiento preciso tanto de la proteína de interés como del hospedero, lo cual indica una investigación previa profunda.

8.- ¿Qué tipos de células de mamíferos se han empleado como hospederos para la obtención de proteínas?

R = Se han utilizado 4 células las cuales vimos en clase: ovario de hámster chino, riñón de hámster, riñón de embrión humano y riñón del mono verde africano.

9.- ¿Qué tipo de marcadores de selección se utilizan?

R = Principalmente existen dos tipos de marcadores de selección utilizados con frecuencia: DHFR (dihidrifolato reductasa) y GS (glutamina sintetasa).

10.- Indica tres posibles objetivos para modificar una proteína por mutagénesis dirigida:

R = a) Incrementar la resistencia de una proteína contra proteasas celulares para facilitar el proceso de separación y aumentar el porcentaje de rendimiento.

b) Cambiar la tolerancia térmica para poder utilizar la célula a temperatura en donde la proteína quedaría desactivada.

c) Cambiar la estabilidad ante cambios de pH por las mismas razones que el punto anterior.

A veces es más fácil trabajar a un PH o temperatura determinada y no siempre coincide con la proteína de interés. Es por esto que se utiliza la mutagénesis dirigida.