Precipitación, separación y Punto Isoeléctrico de proteínas.

...

Tubo No.

Ácido Acético 0.2 M (ml)

Acetato de sodio 0.2 M (ml)

pH

Observaciones

1

0.23

0.02

3.7

Transparente

2

0.15

0.1

4.59

Transparente

3

0.05

0.2

5.37

Muy opalescente

4

0.01

0.24

6.15

Transparente

5

0

0.25

7.23

Transparente

Tabla 5. Determinación del punto isoeléctrico de la insulina.

IV. Cálculos

[pic 3]

[pic 4]

.77[pic 5]

Tubo No.

Moles de Acido Acetico

Moles de Acetato de sodio

1

4.60E-05

4.00E-06

2

3.00E-05

2.00E-05

3

1.00E-05

4.00E-05

4

2.00E-06

4.80E-05

5

0.00E+00

5.00E-05

Tubos.

- 3.7[pic 6][pic 7]

=4.77+ (-1.0606)= 3.7

- 4.59.[pic 8][pic 9]

=4.77+ (-0.1760) = 4.59

- 5.37[pic 10][pic 11]

=4.77+ 0.60206) = 5.37

- 6.15[pic 12][pic 13]

=4.77 + 1.38021 = 6.15

- [pic 14]

[pic 15]

[pic 16]

7.23[pic 17]

V. Discusiones

DISCUSIÓN

En la primera parte de precipitación con sales debíamos lograr separar la mayoría de las proteínas de la clara de

huevo a través del método de “salting out”, es por ello que

primero agregamos una solución saturada de sulfato de amonio ya que es una sal muy soluble y aumenta la interacción proteína-proteína produciendo que estas precipiten, al realizar la prueba de biuret al sobrenadante y al precipitado ambos nos dieron positivos posteriormente al sobrenadante le adicionamos sulfato de amonio sólido y filtramos al volver a realizar la prueba de biuret el filtrado nos dio negativo y el precipitado positivo esto nos indicó que logramos completar la separación de proteínas. En la precipitación por efecto del pH y de solventes logramos ver que en los tubos 1 y 3 donde tenían HCl y regulador de acetatos respectivamente las proteínas precipitaron, en el tubo 2 que contenía clara de huevo y NaOH la clara de huevo se solubilizo completamente esto es debido a que estas proteínas se encontraban muy lejos de su punto isoeléctrico y como sabemos las proteínas en este pH presentan un mínimo de solubilidad es decir presentan una mayor precipitación por lo que decimos que la clara de huevo a un pH básico se encuentra en un punto donde su solubilidad es mayor. Al agregar el etanol se pretendía que las proteínas se solubilizaran menos conforme a la teoría esto fue cierto ya que al añadir solventes orgánicos como etanol a una solución acuosa de proteínas, disminuye la constante dieléctrica del agua así como la interacción proteína-agua, y aumentando la interacción proteína-proteína favoreciendo así la precipitación. Por otro lado la precipitación con metales nos dio positivos con las sales de mercurio, plata y plomo pues al haber iones positivos y negativos que interactúen con las moléculas de agua, se pierde la interacción proteína-agua, por lo que la proteína precipita, sin embargo las sales de bario y sodio no precipitaron a la proteína estas las

solubilizaron, pues se presentó el fenómeno de “salting in”

ya que ahora hay una interacción entre la proteína y los iones de la sal, la interacción con el agua es mas fuerte. En la determinación del punto isoeléctrico de la insulina, solo se observó precipitación en el tubo 3, como ya sabemos el punto isoeléctrico es el pH en el cual la carga neta es 0 y además a este pH la proteína tiene menor solubilidad por lo que precipita.

CONCLUSIÓNES

La solución de las proteínas depende mucho de la cantidad de sales disueltas, el pH y el disolvente utilizado, disminuyendo la solubilidad si la fuerza iónica en la solución aumenta o el se utiliza un disolvente orgánico

.

BIBLIOGRAFIA

Devlin Thomas M. (2004). Bioquímica con aplicaciones. Rreverté. 4° ed. España. 95-97.

Melo R. V., Cuamatzi T.O. (2006). Bioquímica de