Preparación de frotis microbiano y observación bajo microscopio óptico

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Escherichia Coli: Las colonias de E. coli poseen una apariencia bastante inclasificable. Las colonias redondas mantienen tanto un margen entero (es decir, continuo, liso) como una superficie suave. Comúnmente se clasifica dentro de la morfología como bacilo (Tortora et al, 1993).

Bacillus Subtilis: las esporas son centrales, forma elipsoide y al formarse en el interior de la célula dan lugar al hinchamiento de esta (Tortora et al, 1993).

Tinciones diferenciales

Estas tinciones dan reacciones distintas con diferentes tipos de bacterias y por lo tanto permiten distinguirlas. Las tinciones diferenciales más utilizadas son la tinción de Gram y de ácido-alcohol resistencia.

- Tinción de Gram

Desarrollada en 1884 por Hans Christian Gram, la tinción de Gram divide a las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. Para esta tinción se cubre la extensión fijada por calor con un colorante básico morado, generalmente cristal violeta (colorante básico). Su función es dar un color morado o azul a toda la preparación se le llama tinción primaria.

Al poco tiempo se lava el colorante y se cubre la extensión con yodo, un mordiente. El yodo, aparte de matar bacterias, incrementa la afinidad del colorante primario con la célula, formando complejos insolubles con este. El complejo cristal violeta-yodo sirve para intensificar el color del teñido. Cuando se lava el yodo las bacterias Gram positivas y Gram negativas aparecen de un color violeta oscuro o morado. Posteriormente, se lava con etanol (o solución de etanol) y acetona. Esta solución es un agente decolorante que elimina el color morado de las células de algunas especies. El alcohol disuelve los lípidos de la parte externa de la pared celular Gram-negativa, haciendo la pared más porosa. De esta manera, el complejo Cristal violeta-yodo es removido de la capa de peptidoglicano más fina de las bacterias Gram negativas, mientras que la pared más gruesa de las Gram-positivas retiene el tinte en su interior (Tortora et al, 1993).. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para evitar que pierdan la tinción las células Gram positivas. Se vuelve a lavar y se tiñe la preparación con safranina, colorante básico rojo. Nuevamente se lava, se seca y se examina. Cultivos de más de 24 horas de teñidos pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta – yodo.

Características de Escherichica Coli: Las colonias de E. coli demuestran un patrón de crecimiento periódico, creciendo en ondas que resultan en anillos de crecimiento concéntricos en la colonia. Los estudiantes pueden detectar estos anillos bajo el examen microscópico. En la tinción de Gram se tiñe de color rojo por lo que es Gram negativo. Las colonias de E. coli poseen una apariencia bastante inclasificable. Las colonias redondas mantienen tanto un margen entero (es decir, continuo, liso) como una superficie suave. Se observa mayormente en forma de bacilos. Las colonias de E. coli muestran una forma de elevación básica y convexa que es tan inclasificable como la forma de las colonias (Tortora et al, 1993).

Caracteristicas de Bacillus Subtilis: Este género de bacilos Gram positivas tienen la ventaja de poseer diversos mecanismos para asegurar su sobrevivencia ante condiciones físicas desfavorables, bajo estas condiciones Bacillus inicia una serie de respuestas; si estas respuestas fallan para poder mantenerse en estado vegetativo se induce la esporulación (Petersohn et al., 2001).

Los microorganismos son seres demasiado pequeños para observarlos a simple vista. Comprende entre bacterias, virus, hongos entre los que se encuentran levaduras y mohos, protozoos y algas (microscópicas). En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante información para la identificación temprana y definitiva de los microorganismos.

El comerciante holandés y científico Anton Van Leeuwenhoek fue el primero que observó realmente microorganismos con lentes de aumento. Entre 1674 y 1723 informó a la Royal Society de Londres lo que había observado mediante su microscopio sencillo. Una especie de > (Tortora et al, 1993).

El microscopio de Anton Van Leeuwenhoek era un microscopio simple que utilizaba una sola lente. Posteriormente, Roberto Hooke construyó un microscopio de varias lentes, llamado microscopio compuesto. La historia reconoce la construcción del primer microscopio a un óptico holandés, Zacharias Jansen, hacia 1600. Sin embargo, estos microscopios eran de una baja calidad. En 1830, Joseph Kackson Lister desarrolló un microscopio mejorado. A partir de este microscopio se desarrollaron diversas innovaciones que dieron lugar al desarrollo moderno del microscopio compuesto (Tortora et al, 1993).

El microscopio se compone de diversas partes, pero comúnmente se divide en:

Parte mecánica:

- Sistema de soporte:

- Pie: Sirve de apoyo y para darle estabilidad al microscopio. En él está integrada la fuente luminosa.

- Brazo: Es una columna que parte del pie sirve para sujetar el tubo. Puede ser recto o arqueado.

- Tubo: Es una cámara oscura que está unida al brazo. En su parte inferior está el revolver son los objetivos y en su parte superior los oculares.

- Platina: Es una plataforma horizontal sobre la que se engancha con dos pinzas el portaobjetos. Tiene en su zona central un orificio que permite el paso de la luz y un sistema de cremallera manejado por dos tornillos que permiten el movimiento de la muestra.

- Revolver: Sujeta los objetivos y gira para permitir el cambio de objetivo.

- Sistema de ajuste:

- Tornillo macrométrico: Tornillo de enfoque que mueve la platina hacia arriba y hacia abajo de forma brusca y poco precisa.

- Tornillo micrométrico: Tornillo de enfoque que mueve la platina hacia arriba y hacia abajo de forma lenta y muy precisa.

- Parte óptica:

- Fuente de iluminación: Es una lámpara halógena que permite el encendido o el apagado con un interruptor y cuya intensidad puede ser graduada. Puede tener en su parte superior un anillo para permitir la colocación de filtros que facilitan la visualización.

- Condensador: Es un sistema de lentes situado bajo la platina que