REACCIONES BIOQUIMICAS

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que la reducción de nitratos es mayor cuando los microorganismos fueron cultivados en medios semisólidos y más bajo en medios líquidos.

Reactivos:

 Ácido Acético 5N 30%.

 Ácido acético glacial.

 Agua desionizada.

 Reactivo A: α- Naftilamina 0.5%, N,N-dimetil- α-naftilamina 0.6%.

 Ácido acético glacial, 5N, 30%.

 α- Naftilamina 0.5%, o N,N-dimetil- α-naftilamina 0.6%.

a) Métodos de preparación.

 Disolver cada sustancia química en menos de 1000mL de ác. Acético 5N por calentamiento suave.

 Transferir la solución en un frasco graduado de 1L y llevar a 1000mL con ác. Acético.

 Filtrar la solución a través de algodón absorbente lavado.

 Conservar en botella de vidrio color caramelo con tapa.

 Rotular bien

 Reactivo B: Ácido sulfanílico

 Ácido sulfanílico (ác. P-aminobenceno sulfónico).

 Ácido glacial acético, 5N, 30%

1. Métodos de preparación:

 Disolver el ácido sulfanílico en menos de 1000mL ác. Acético 5N.

 Transferir la solución en un frasco graduado 1L y llevar a 1000mL con ác. Acético 5N.

 Conservar en botella de vidrio con tapa.

 Rotular bien,

 Reactivo Nessler

1. Disolver 5g de yoduro de potasio KI en 5 mL de agua desionizada (el agua no debe de contener amoniaco).

2. Agregar una solución saturada de cloruro de mercurio fría hasta que aparezca un leve precipitado después de la agitación.

3. Agregar 40mL de hidróxido de sodio 9N.

4. Diluir con agua desionizada a 100mL

5. Permitir que la solución repose 24h antes del uso. Puede formarse un leve precipitado en el fondo; no agitar sedimento cuando se utilice.

6. Conservar en botella de vidrio recubierta de parafina o en botella de color caramelo; evitar exposición a la luz.

7. Rotular correctamente.

Inoculación:

 Medio Liq.: Inóculo denso

 Medio de agar inclinado: estría y punción en el fondo del tubo.

Incubación:

 Temp. Incubación 35°C

 Tiempo 12-24h (rara vez hasta 5 días)

 Deben comprobarse de manera simultánea dos controles:

1. Tubo control 1: inoculado con un microorganismo conocido nitrato positivo.

2. Tubo control 2: no inoculado, pero incubado en las mismas condiciones que los tubos inoculados. Control para verificar si hay presencia de nitrito en el medio.