TRABAJO PRÁCTICO DE SANGRE.

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Tal y como puede apreciarse en la figura, cada retículo se divide en nueve cuadrados grandes de 1mm de lado. Siendo los cuadrados de las esquinas los destinados al recuento de leucocitos (al existir éstos en menor número que hematíes, se precisa menor número de líneas de referencia), a su vez dichos cuadrados se subdividen en 16 cuadrados denominados medianos de 0.25 mm de lado.

El cuadrado central es el destinado al recuento de hematíes y plaquetas. Dicho cuadrado se subdivide en 25 cuadrados medianos (0.2mm de lado) y a su vez éstos se subdividen en 16 cuadros denominados pequeños. Por lo tanto, el número total de cuadraditos constituyentes del cuadro central es de 400 cuadrados.

Objetivo:

-El objetivo es aislar los leucocitos y calcular la fórmula linfocitaria absoluta

Materiales:

- Sangre humana

- Portaobjetos

- Microscopio

- Ácido acético glacial

- Azul de metileno

- Agua destilada

- Cámara de Neubauer

- Tubo de vidrio

- Micropipeta

Metodología

Separación y tinción de leucocitos

Para el recuento de leucocitos se emplea el Líquido de Turk

Ácido acético glacial 1 a 3 ml

Azul de metileno (solución acuosa al 1%) 1ml

Agua destilada 100 ml

El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento. El ácido acético produce lisis de los eritrocitos sin alterar a los leucocitos. El azul de metileno tiñe el núcleo de los leucocitos para que estos puedan observarse mejor.

Dilución en tubo:

Se colocan 20 ul de sangre y 4 ml de líquido de dilución de Turk en un tubo de Kahn. Se obtiene de este modo una dilución al 1:20.

Una vez preparada la cámara de Neubauer con el cubreobjetos bien adherido, se carga la cámara con una micropipeta, se deja salir una pequeña gota de tamaño suficiente para llenar por capilaridad el espacio comprendido entre el pivote central y el cubreobjetos. Se deja la cámara en reposo de 1 a 3 minutos para que las células se depositen de modo que todos queden en un mismo plano. Luego se lleva al microscopio y con menor aumento, se comprueba la uniformidad de los elementos.

Recuento de leucocitos:

Utilizando un objetivo de menor aumento, se cuentan los elementos existentes o bien los glóbulos blancos distribuidos en los cuatro cuadrantes de la cámara de Neubauer (4 mm²). Se debe dividir la cantidad total de leucocitos por 4 para obtener el número de estos en 1 mm², luego el resultado se multiplica por 10 para obtener el número de leucocitos en 1 mm³ de la dilución y finalmente por 20 para obtener el resultado en 1 mm³ de sangre.

Ejemplo:

Cuadrado N° Número de leucocitos

1 35

2 37

3 40

4 32

_

Total de leucocitos: 144: 4 =36

36 x 10x 20 = 7.200 leucocitos por mm³ de sangre

Fórmula leucocitaria absoluta que expresa la cantidad de cada especie de leucocito por mm3 de sangre.

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Recuento de eritrocitos

Se realiza de manera similar al recuento de leucocitos, sólo que se realiza una dilución 1:200 con solución fisiológica.

Conteo de glóbulos rojos

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De los 25 cuadrados en que se encuentra subdividido, se cuentan los cuatro angulares y el central, con un recuento total representativo de 1/5 de milímetro cuadrado. Sobre la base de una dilución de 200, de un recuento de 1/5 mm2

y una profundidad de 0.1 mm, el cálculo se efectúa como sigue:

Eritrocitos contabilizados X 5 X 200 X 10 = NUMERO DE ERITROCITOS POR mm3, o bien

Eritrocitos contabilizados X 10,000 = NUMERO DE ERITROCITOS/ mm3