COMPONENTES DEL KIT Neogen 9515B

...

Usando una nueva punta por cada muestra, adicione 100 ul de extracto filtrado y diluido a su correspondiente pozo rojo. Con esa misma punta mezcle el contenido 3 veces (aspirar y botar suavemente).

Sea con puntas nuevas o usando la punta específica de cada pozo transfiera 100 ul a su correspondiente pozo blanco. (No se olvide cada muestra es una punta nueva). Al completar la transferencia de todos los pozos agitar suavemente por deslizamiento en superficie plana por 20 segundos. Elimine los pozos rojos.[pic 3]

Incubar por 10 minutos los pozos blancos. (Guardar los pozos en oscuridad por 10 minutos).

[pic 4]

LAVADO: Después de la incubación, botar todo el contenido de los pozos. Golpee enérgicamente los pozos sobre papel toalla para eliminar residuos líquidos. Usando una pizeta o una jeringa llenar los pozos con el Buffer de lavado. Botar el líquido. Repetir 3 veces más. Después de botar la última solución de lavado, golpee rápida y enérgicamente los pozos sobre papel toalla para eliminar residuos líquidos.

[pic 5]

Usando 1 nueva punta de pipeta por cada pozo , adicionar 100 ul de Substrato (frasco verde) a todos los pozos. Agitar por deslizamiento en superficie plana por 20 segundos.

Incubar por 10 minutos pero en oscuridad.[pic 6]

Usando 1 nueva punta de pipeta por cada pozo adicionar 100 ul de Solución stop (frasco rojo) a todos los pozos. Agitar por deslizamiento en superficie plana por 20 segundos

Si hace lectura visual, ponga los pozos encima de un papel blanco (para ver mejor los colores) y haga lectura mirando de arriba hacia abajo. (Eso es todo). Compare el tono de color de la muestra contra los correspondientes tonos de color de los controles MIENTRAS MÁS AZUL ES EL POZO ES MENOS HISTAMINA. MIENTRAS MÁS ROJO ES MAS HISTAMINA.[pic 7][pic 8][pic 9]

Ejemplo: CONTROL corrido a 10 ppm la muestra tiene menos de 10 ppm

- RECOMENDACIONES

- El Kit debe ser mantenido en refrigeración (2-8ºC). La congelación lo destruye y todos los pozos generaran un color Rojizo.

- Comience a trabajar el Kit, cuando los reactivos estén a temperatura ambiente. Esto está referido a pozos, control Conjugado, substrato y solución stop.

- No trabaje el Kit en lugares expuestos al polvo y a plena luz del día.

- Trabaje el Kit en lugares bajo techo.

- El Kit ALERT HISTAMINA puede ser usado para determinar Histamina al punto de corte 10, 15,20, 40ppm, etc. Sin Necesidad de cambiar el control proveído en el kit. Sólo se debe cambiar la manera como se realiza la dilución de la Muestra. De acuerdo a la tabla-Preparación del Extracto.

- Se recomienda para la fase de extracción, usar envases plásticos (bolsas o frascos con tapa), debido a que el vidrio Captura la histamina, salvo que se disponga de material de vidrio especial o ya tratado con ácido.

- Después de hacer la dilución (sea con agua o con el diluente de muestra), esta debe mezclarse mediante agitador magnético.

- Agua es agua destilada o Agua San Luis sin gas o similar. No usar agua de caño o agua des ionizada. Después de cualquier dilución de Líquidos no olvide mezclar mediante suave agitador magnético.

- Todos los componentes del kit deben estar a temperatura ambiente antes de ser usados.

- PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

- 6 sobres conteniendo polvo Buffer diluente (sample diluent) para extracto de muestra (10 mM PBS). Se disuelve 1 sobre en 1 litro de agua. Se guarda en oscuridad a temperatura ambiente.

- 2 frasco cada uno con 40 ml de Buffer de lavado concentrado (Wash buffer). El contenido de 1 frasco se disuelve en 960 ml de agua. Se guarda en oscuridad a temperatura ambiente

- RESULTADOS:

- Los resultados se realizan por lectura visual, comparando los tonos de color de los estándares versus la muestra.

- Estándares 0, 2.5, 5, 10, 20 ppm. (Intensidad de color del transparente al rojo oscuro).