MARCO METODOLÓGICO
Enviado por Rebecca • 29 de Noviembre de 2017 • 1.682 Palabras (7 Páginas) • 576 Visitas
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3.4.3 Determinaciones bioquímicas:
3.4.3.1 Colesterol enzimático.
Fundamento de la técnica: El colesterol presente en la sangre en forma de esteres de colesterol, es hidrolizado por la enzima del colesterol esterasa, y posteriormente oxidado por el colesterol oxidasa, produciéndose en el proceso peróxido de hidrogeno. Esta se detecta con el sistema Trinder, observándose un color rosado, cuya intensidad es proporcional a la concentración del colesterol en la muestra y es medida a 500nm. (Método CHOP-PAP 500, Bioscience, colesterol enzimático). VR: hasta 180mg/dl.
Técnica:
En tubos de ensayo 12x15 convenientemente rotulados como indica el cuadro agregar:
Muestra
Patrón
Blanco
1,0 ml
1,0 ml
1,0ml
Reactivo de trabajo
0,01 ml
--------------
------------
Muestra
------------
O,01 ml
---------------
Patrón 200mg/dl
Mezclar en incubar 10 minutos a 37 °C. Ajustar el cero con el blanco y leer las muestras y el patrón a 500nm. El color es estable por una hora.
Cálculos: colesterol en muestra mg/dl = Absorbancia muestra × 200mg/dl[pic 3]
Absorbancia patrón
3.4.3.3 Triglicéridos.
Fundamento de la técnica: La enzima peroxidasa actúa sobre el peróxido de hidrogeno produciendo un color rojo en la solución, producto de la reacción enzimática. La intensidad del color producido en la reacción es directamente proporcional a la concentración de triglicéridos en la muestra cuando es medida a 485nm. (Método GPO. Trinder 1350, Bioscience, determinación cuantitativa de triglicéridos). VR: hasta 165mg/dl
Técnica:
En tubos de ensayo 12x15 convenientemente rotulados como indica el cuadro agregar:
Muestra
Patrón
Blanco
1,0 ml
1,0 ml
1,0ml
Reactivo de trabajo
0,01 ml
--------------
------------
Muestra
------------
O,01 ml
---------------
Patrón 200mg/dl
Mezclar en incubar 10 minutos a 37 °C. Ajustar el cero con el blanco y leer las muestras y el patrón a 520nm.
Cálculos: triglicéridos muestra mg/dl = Absorbancia muestra x 200mg/dl[pic 4]
Absorbancia patrón
3.4.3.3 HDL colesterol.
Fundamento de la técnica: La separación de las HDL de las otras lipoproteínas presente en el suero se logra mediante la precipitación de las LDL, VLDL, y Quilomicrones con un reactivo precipitante formado por acido fosfotungstico e iones de magnesio. En el sobrenadante quedan solamente las HDL (colesterol en lipoproteínas de alta densidad). (550, Bioscience, determinación de HDL colesterol).
Técnica:
En tubos de ensayo 12x15 convenientemente rotulados como indica el cuadro agregar:
Muestra
Patrón
Blanco
2,5 ml
2,5 ml
2,5 ml
Reactivo de trabajo
0,2 ml
--------------
------------
sobrenadante
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O,2 ml
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Patrón 50 mg/dl
Mezclar en incubar 10 minutos a 37 °C. Ajustar el cero con el blanco y leer las muestras y el patrón a 500nm.
Cálculos: HDL colesterol = Absorbancia muestra x 3 x 50mg/dl
Absorbancia patrón
V.R: Normal: superior a 35 mg/dl en el hombre y 40 mg/dl en la mujer
3.4.3.4 LDLc y VLDLc
Los niveles de estos analitos se obtuvieron por la aplicación de la formula Friedewald, que solo es utilizada para aquellas muestras que no presenten quilomicrones y la concentración de triglicéridos sea inferior a 400 mg/dl.
VLDLc= triglicéridos/5 VR: 5 – 42 mg/dl
LDLc= Colesterol total – VLDLc – HDLc VR: 30 – 190 mg/dl
3.4.3.5 Glucosa sérica.
Fundamento de la técnica: La glucosa oxidasa GOD reacciona específicamente con la glucosa en la muestra y se obtiene un compuesto de color rojo cuya intensidad es proporcional a la concentración de la glucosa en la muestra, la cual es medida a 510nm. (método GOD-PAP 900 Bioscience, determinación enzimática cuantitativa de glucosa) VR: 70-110mg/dl
Técnica:
En tubos de ensayo 12x15 convenientemente rotulados como indica el cuadro agregar:
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