Análisis enzimático cualitativo Laboratorio Jueves 7-9 am
Enviado por Helena • 6 de Noviembre de 2017 • 1.981 Palabras (8 Páginas) • 1.453 Visitas
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La mayoría de las reacciones en cuerpo humano deben ser catalizadas, así la célula regula de manera diferencial su velocidad y lo hace regulando la actividad de los catalizadores de cada una de ellas.Toda catálisis enzimática requiere una unión específica y una relatividad específica de la proteína con los sustratos.6
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MATERIAL:
Tubos de ensaye
Pipetas de 1.0 ml
Pipetas de 5.0 ml
Propipetas
Gradillas
Tapones de algodón
Vasos de precipitado
EQUIPO:
Platina caliente
Incubadora 37°C
REACTIVOS:
Semilla vegetal (semilla de sandía u otra que contenga ureasa)
Urea al 2%
Solución de Azul de bromotimol – NaOH
Leche
Oxalato de amonio 2%
Solucion de Renina
Cloruro de calcio 10%
PROCEDIMIENTO:
Experimento No. 1 Efecto del calor sobre la actividad de las enzimas "Actividad de la ureasa”.
Tubo 1 2 3
Semilla Vegetal pizca pizca pizca
Agua destilada 0 5.0 ml 5.0 ml
Mezclar para tratar de homogenizar el polvo de sandía y enseguida coloque un tapón de algodón a los tubos 1 y 2 y colóquelos en baño a ebullición durante 20 minutos. (Cuidar que no se acabe el agua del baño).
Agua 5.0 ml 0 0
Azul de
Bromotimol 2 Gotas 2 Gotas 2 Gotas
Añadir ácido débil (GOTAS) en caso de que la solución tenga un color azul.
Urea 5.0 ml 5.0 ml 5.0 ml
Mezclar y tomar el tiempo que transcurre hasta alcanzar el vire del color amarillo al azul en cada uno de los tubos.
Experimento No. 2 Determinación de actividad de la Renina.
Tubo 1 2 3
Leche 3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml
Oxalato de
Amonio 0 0.5 ml 0.5 ml
Solución renina 3 Gotas 3 Gotas 3 Gotas
Mezclar e incubar a 37°C durante 10 minutos y anotar los cambios observados en cada uno de los tubos. Posteriormente, calentar el tubo No. 2 a ebullición y enfriar. Cuando ya estén fríos los tubos agregar:
Cloruro de Calcio 0 10 Gotas 10 Gotas
Mezclar y comparar los cambios observados en los tubos No 2 y 3 con el 1.
RESULTADOS:
Experimento 1
Reacción al azul de bromotimol
Tubo 1
+
Tubo 2
x
Tubo 3
+
Experimento 2
Tubos que más cuajaron 1 = mayor 3= menor
Tubo 1
2
Tubo 2
3
Tubo 3
1
DISCUSIÓN:
CÓDIGO NUMÉRICO: 4 dígitos precedidos por las iniciales EC (Enzyme Commission numbers)
EC 2.7.1.1 - clase - sublcase - sub-subclase - número de orden (o indicación relacionada con algún sustrato)
Experimento #1
La razón de que no le pasara nada al tubo 2 es debido a que no estaba en solución acuosa. La enzima fue desnaturalizada debido a la ebullición; esto evita que realice catálisis. Las reacciones cambian si se aumenta la temperatura pero también el funcionamiento de las enzimas tiene un cambio cuando hay temperaturas elevadas, aquí es cuando ocurre la desnaturalización. Las enzimas tienen una temperatura óptima y cuando la tienen la función es más eficaz. Los valores óptimos dependen del pH y de la fuerza iónica. 4
La ureasa cataliza a la urea por medio de la hidrólisis y da dos moléculas de amoniaco. La ureasa es una enzima que tiene función de descomponer compuestos órganicos, que en este experimento fueron las semillas de sandía. [pic 9]
El azul de bromotimol es un indicador muy utilizado para determinar el PH en zonas próximas a la neutra , pH=7, porque tiene un intervalo de viraje del amarillo al azul entre valores 6.0 y 7.6 (aproximadamente). 8
La reacción del azul de bromotimol no ocurrió como se esperaba, después de siete minutos de haberle agregado la sustancia le agregamos una gota más y fue cuando tuvo un cambio instantáneo. Probablemente el cambio fue porque se modificó el pH y se contaminó el azul de bromotimol.
[pic 10]
Experimento #2
La quimosina, cuyo código es E.C.3.4.23.4, es un enzima proteolítico que se obtiene tradicionalmente del abomaso (cuarto estómago) de terneros jóvenes. Se encuentra, como enzima digestiva, mezclada con pepsina, siendo la proporción de quimosina, y la calidad del cuajo, mayor cuanto más joven es el animal. También se encuentra en otras especies animales, como el cerdo. Durante muchos siglos se ha utilizado como en la fabricación de queso el estómago de los terneros secado al sol y triturado.
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