CUESTIONARIO DE METODOS DE ESTERILIZACION

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- La muerte de los microorganismos por calor húmedo es debido a la desnaturalización y coagulación de algunas proteínas en la célula. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:

- El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua.

- El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire.

- Los métodos que utilizan calor húmedo son

- Vapor de agua saturado a presión

- Tindalización (esterilización fraccionaria)

- Vapor fluente

- Calor más proceso bactericida

- El vapor de agua saturado a presión es el agente esterilizante más práctico y seguro. La temperatura de este es siempre superior a la de ebullición normal. Además. Ofrece las ventajas de la rapidez de penetración y humedad abundante. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproducción de éstos, hecho que lleva a su destrucción.

El aparato donde se lleva a cabo este tipo de esterilización se llama autoclave. Este consiste en un recipiente metálico de doble pared, con una tapa que ajusta a presión por medio de tomillos. Posee un manómetro que indica la presión a la que llega el vapor: una espita que regula la salida de vapor, una válvula de seguridad; una rejilla de bronce donde se coloca el material a esterilizar, debajo de la cual coloca agua destilada.; una fuente de calor.

- El autoclave puede operar a 120 ºC a una presión de una 1 atm durante 15 minutos o sino a ¾ de atmosfera a 135 ºC durante 20-30 minutos. El tiempo necesario dependerá del material y volumen del recipiente.

- Un autoclave me permite esterilizar medios de cultivos, soluciones diversas y los cultivos bacterianos que se desechan.

Requisitos para operar un autoclave

- La espita debe permanecer abierta hasta lograr que salga un flujo constante de vapor, esto indica que todo el aire ha sido sustituido por vapor de agua. Si queda atrapado aire, la temperatura disminuirá ocasionando una disminución en la efectividad del proceso.

- No debe cargarse apretadamente al material, pues se forma bolsas de aire que disminuyen la temperatura de esterilización.

- De ser posible, no utilizar materiales voluminosos ya que necesitan un calentamiento mayor y por lo tanto mayor tiempo de esterilización.

- Siempre leer la temperatura, no guiarse por la presión que indica el manómetro.

- La Tindalización es un método para esterilizar líquidos, geles o semisólidos como por ejemplo medios de cultivos que contienen carbohidratos, huevo y suero, donde se los exponen a temperaturas superiores a los 100°C.

Consiste en calentar el material a 80°C y dejarlo un tiempo para permitir el desarrollo de las esporas que luego son destruidas con un segundo calentamiento.

- El principio de este método consiste en someter el compuesto o medio de cultivo a esterilizar a una corriente de vapor a 100ºC. Se emplea el esterilizador de Arnold, similar al autoclave. No es hermético, el vapor producido por el calentamiento del agua, va saliendo por un condensador que lo traslada en forma de agua, nuevamente a la caldera.

Al no acumularse el vapor, no aumenta la presión y por consiguiente la temperatura se mantiene cte. La exposición al vapor fluente del material a esterilizar será de 20 a 30 minutos.

El punto negativo de este método es que no se consigue una eliminación completa de microorganismos. Por lo tanto, esta práctica es considerada más de desinfección que de esterilización.

- Para destruir los microrganismos se pueden utilizar:

- Radiación ionizante: rayos X, rayos gamma, rayos catódicos.

- Radiación no ionizante: luz ultravioleta, rayos infrarrojos.

- El método de radiación ionizante, se debe a la acción de un rayo radiante que lleva a las moléculas a un estado de excitación interna. Este rayo actúa sobre los ácidos desoxirribonucleicos y sistemas enzimáticos.

Todo depende de la sensibilidad de las moléculas involucradas y de la energía total de radiación, causante de la muerte de las moléculas.

- Factores que afectan la acción de los rayos:

- Oxígeno: Se producen radicales oxidados procedentes del agua, pudiendo formarse peróxidos los cuales favorecen la acción de los rayos.

- Humedad: Cuanta mayor humedad haya más fácil será la eliminación, de lo contrario, la desecación aumenta la resistencia de los M.O. a las radiaciones.

- El principal campo de aplicación de los rayos ionizantes es en Farmacia y medicina, pero en industrias alimentarias no es tan común ya que tiene un alto costo y la radiación que producen durante las irradiaciones. Si se realizan en soluciones que contengan proteínas (leche), puede ocurrir la desnaturalización de estas. Además producen cambio en el color y sabor de alimentos. Las radiaciones no inactivan las toxinas y tienen poca acción sobre esporas. En el caso de la leche, se recurre a la pasteurización, que NO elimina todos los microorganismos, solo a los perjudiciales para la persona.

- Las radiaciones de acción bactericida más intensa son las que tienen longitud de onda de unos 2650 A. El choque de un cuanto de radiación no ionizante con un átomo, no basta para expulsar un electrón de éste, pero es suficiente para llevar un electrón a un nivel de energía más elevado produciendo excitación. Producen la muerte de las células o un alto porcentaje de mutaciones, las cuales pueden ser letales o producir la pérdida de sintetizar una o más enzimas.

- Los microbios tales como: bacterias, virus, hongos, levaduras, protozoos... sean gérmenes de tipo patógeno o no, son seres vulnerables a los efectos de la luz ultravioleta en las longitudes de onda próximas a 253.7 nanómetros (rango UV-C), donde ésta actúa como germicida afectando a la estructura molecular del microorganismo, esterilizándolo