Cromatografía en columna.

...

Una vez que toda la sílica se encuentre dentro de la columna, se debe tener cuidado de no dejarla secar, es decir, se agrega un poco de disolvente cuando el adsorbente comience a secarse.

Parte C. Preparación de la muestra

La muestra que se requiera separa puede encontrarse en estado líquido o sólido. En este caso, se trata de una muestra líquida: tintas de colores.

Se mezclaron 2 tintas y se disolvieron con la mínima cantidad de disolvente en que fueron solubles (etanol) y se colocó en un vaso de precipitados para su posterior uso.

Parte D. Aplicación de la muestra a la columna

Al momento de aplicar la muestra, se debe tener cuidado de no mezclarla con el adsorbente, es por eso que la mezcla de tintas se añadió lentamente por las paredes de la pipeta y bureta. Antes de añadir la mezcla, se bajó el nivel de disolvente hasta casi tocar el adsorbente, se añadió la muestra, y se dejó correr el disolvente hasta el nivel de la sílica. El paso de disolvente se controla con ayuda del algodón y la sílica en la pipeta pasteur, y con ayuda de la llave, algodón y sílice en una bureta.

Una vez que la columna se descargó lo suficiente, se añadió una cantidad considerable del disolvente y se volvió a descargar, para que la muestra sea adsorbida por la sílica. La operación anterior se repite tantas veces como sea necesario hasta que al agregar disolvente, este no adquiera coloración.

Una vez que el aparato esté listo, se cierra la llave de la bureta y se añade el primer disolvente previamente elegido.

Parte E. Elusión de la columna

La elusión de la muestra se empezó utilizando el disolvente de menor polaridad, en este caso, hexano. Después, se agregó una mezcla de iguales proporciones del disolvente antes añadido y el que le sigue en polaridad, es decir, hexano-cloroformo. Se aumenta gradualmente la polaridad de las mezclas hasta llegar a 100% agua.

Se añade una mezcla de disolventes o disolvente puro después de que la mezcla anterior esté a ras del adsorbente y la muestra. (Ver figura 3)

[pic 3]

Figura 3. Diagrama del desarrollo de una cromatografía en columna.

Parte F. Colección de fracciones

Cada uno de los disolventes o sus mezclas eluyó una parte de la columna. Dichas partes, que se diferencian por los colores del disolvente desalojado, se recogieron en pequeños matraces o vasos de precipitado.

Se recogen tantas fracciones como sea necesario hasta finalizar la columna. Cada matraz debe estar etiquetado con el número de fracción que le corresponde.

Parte G. Identificación

De las fracciones recogidas se seleccionaron las más intensas. Dichas fracciones se inocularon en una placa para cromatografía y se corrieron en un disolvente de polaridad media.

RESULTADOS

De las muestras preparadas, se tomó 0.5 mL, para cada cromatografía (ver figura 4).

[pic 4]

Figura 4. Muestras de tinta preparadas para llevar a cabo la cromatografía.

Se añadieron poco a poco las siguientes mezclas de disolventes:

- Hexano 100%

- Hexano/Cloroformo

- Cloroformo 100%

- Cloroformo/Acetona

- Acetona 100%

- Acetona/Metanol

- Metanol 100%

- Metanol/Agua

- Agua 100%

De acuerdo a la polaridad de los disolventes, se recogieron las fracciones presentadas en la tabla 1. Los compuestos menos polares se desplazan con disolventes poco polares y avanzan rápidamente a través de la columna, siendo recuperados en las primeras fracciones recogidas. Los componentes más polares avanzan más lentamente, pues necesitan aluyentes más polares y se recogen en las últimas fracciones.

Tabla 1. Resultados individuales de cada fracción recolectada.

FRACCIÓN

CARACTERÍSTICAS

[pic 5]

La primera fracción constó de eluir la muestra con hexano, la cual presentó una aparición de líquido color azul con presencia de precipitaciones en tono rosado, lo cual pudo ser parte de la fase estacionaria al no haberse cubierto completamente el fondo de la bureta con el algodón y parte de la sílica gel pudo ser transferida por medio de esta.

[pic 6]

La segunda fracción corresponde a una elusión por parte de hexano y cloroformo 50:50 con la finalidad de observar un cambio y logar la separación de la tinta, es por ello que el cambio de tonalidad es notorio a pesar de la poca polaridad de los eluyentes requeridos; esta fracción mostró características diferentes a la fracción uno en cuanto al flujo de la muestra, la cual fue constante, y a su vez las características físicas de esta eran de tonalidad violeta- morado eléctrico ( con ciertas apariciones metalizadas del color)

[pic 7]

La fracción eluida con cloroformo, el cual presenta una polaridad intermedia fue la fracción que dio el tono azul de la muestra de combinación de tintas; el tono azul presente mostraba tonalidad metálica puesto que el tono azul era bastante perceptible comparado con las fracciones anteriores

[pic 8]

Fracción eluida con cloroformo y acetona (50:50) presenta cambio de tonalidad lila, dicho de esta manera debido a que la coloración ya no es intensa comparada con las fracciones anteriores.

[pic 9]

Fracción eliuda con acetona; el cambio de coloración es poco perceptible con la fracción anterior; sin embargo ésta presenta una tonalidad menos intensa, puesto que el color de la fracción se encuentra mate.

[pic 10]

Eliuda con atona y metanol (50:50) La muestra se torna color