Determinación de la carga bacteriana de muestra de la placa dentaria sembradas en agar de trypticase

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Agar Tripticasa soya (TSA)

TSA es una medio multiuso, producido por la digestión enzimática de soya y caseína. Es la base de otros tipos de agar, por ejemplo el agar sangre está hecho de TSA enriquecido con sangre. TSA permite crecer muchas bacterias semifastidosas incluyendo algunas especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria, Neisseria, y Vibrio.

Medio utilizado para propósitos generales, favorece el desarrollo y aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos.

El agregado de sangre, permite el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes y la observación de reacciones de hemólisis.

FundamentoLa tripteína y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en péptidos, aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya aporta también carbohidratos que estimulan el crecimiento de muchos microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

Adicionado con 5-10 % sangre, se logra un medio enriquecido y adecuado para observar reacciones de hemólisis.

Es un medio adecuado para cultivar y mantener cepas de Aeromonas, y aumentando el porcentaje de cloruro de sodio, para mantener cepas de algunos Vibrios (excepto V. cholerae).

InstruccionesDisolver 40 g de polvo deshidratado por litro de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Distribuir y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 118-121°C.

Siembra

Por inoculación directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.

Incubación

Las condiciones de temperatura, tiempo y atmósfera de incubación, serán acuerdo al material a estudiar.

Resultados

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Características del medio

Medio preparado: ámbar.

Medio preparado con 5% de sangre: rojo cereza.

Almacenamiento

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC.

3.- MATERIALES Y MÉTODOS

- Obtener una muestra de placa dentaria.

Para poder realizar un buen cultivo no depende solo del agar sino también de la muestra y de la forma en la que se coloca en la caja Petri que es donde vamos a realizar nuestro cultivo para luego llevarla a la incubación.

- Realizar un buen cultivo para así poder tener un resultado exitoso.

Para realizar un buen cultivo tenemos primero que basarnos en las indicaciones del envase del agar y el procedimiento a seguir en este caso para comenzar disolvemos 40 g de polvo deshidratado por litro de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Distribuir y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 118-121°C.

- Realizar el conteo de la carga bacteriana una vez pasado las 24 horas de incubación

Una vez cumplido el tiempo de incubación que son 24 horas procedemos hacer el conteo de la carga bacteriana, para esto nos ayudamos del equipo para conteo de colonias bacterianas, una vez obtenido el resultado procedemos hacer los cálculos y determinamos la carga bacteriana.

4.-RESULTADOS Y DICUCIONES

REGISTRO DE DATOS INDIVIDUAL

- N# de bacterias que se desarrollaron en la caja Petri = 10 UFC

- Microlitros utilizados = 50µl

- Cantidad de agua= 1000 ml

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[pic 5]

COLONIA BACTERIANA

REGISTRO DE DATOS GRUPALES

DATOS

UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS

GRUPO 1

200 UFC

GRUPO 2

660 UFC

GRUPO 3

1160 UFC

GRUPO 4

1040 UFC

GRUPO 5

100 UFC

GRUPO 6

80 UFC

GRUPO 7

200 UFC

PROMEDIO GEOMETRICO

5.-CONCLUSIÓN

Podemos concluir que el medio utilizado para propósitos generales, favorece el desarrollo y aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos y además permite el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios.

6.-BIBLIOGRAFÍA

1. Baron S et al., (editors). (1996). Baron's Medical Microbiology (4th ed. edición). University of Texas Medical Branch. (via NCBI Bookshelf). [En línea]

2. Madigan M, Martinko J (editors). (2005). Brock Biology of Microorganisms (11th ed. edición).